青光眼             1284                                      AB0522

　　热休克蛋白47在Tenon囊成纤细胞中的表达及意义

　　盘如刚 陈晓明 李茅 刘东敬

　　四川大学华西医院眼科 610041

　　目的：研究TGF-β1对Tenon囊成纤细胞热休克蛋白47（HSP47）和Ⅰ型胶原蛋白和基因表达的影响，探讨HSP47在Tenon囊成纤细胞中的表达及意义。

　　方法：（1）取新近发病的青光眼患者的Tenon囊组织，采用组织块贴壁培养法原代培养Tenon囊成纤维细胞，加入不同浓度的TGF-β1作用于Tenon囊成纤维细胞。（2）实验组加入TGF-β1终浓度分别为10、5、1、0.1、0.01 ng/ml，对照组不加TGF-β1，作用于Tenon囊成纤维细胞24h，用免疫组织化学方法检测Tenon囊成纤维细胞Ⅰ型胶原纤维和HSP47的蛋白表达。（3）实验组加入TGF-β1终浓度分别为10、5、1、0.1、0.01 ng/ml，对照组不加TGF-β1，作用于Tenon囊成纤维细胞24h，实时荧光定量PCR技术检测Tenon囊成纤维细胞Ⅰ型胶原纤维和HSP47mRNA表达。（4）终浓度为5ng/ml TGF-β1作用于Tenon囊成纤维细胞12h、24h、48h，实时荧光定量PCR技术检测Tenon囊成纤维细胞Ⅰ型胶原纤维和HSP47mRNA表达。

　　结果：（1）无TGF-β1刺激的Tenon囊成纤维细胞，几乎没有HSP47和Ⅰ型胶原纤维蛋白表达，加入不同剂量的TGF-β1刺激Tenon囊成纤维细胞24h后，HSP47和Ⅰ型胶原纤维蛋白有表达，随着TGF-β1浓度的增加，HSP47和Ⅰ型胶原纤维蛋白表达逐渐增强。（2）不同浓度的TGF-β1刺激Tenon囊成纤维细胞，1ng/ml及以上浓度的TGF-β1作用于Tenon囊成纤维细胞，HSP47和Ⅰ型胶原mRNA表达与对照组相比差异有统计学意义。随着TGF-β1浓度增加， HSP47和Ⅰ型胶原mRNA表达增强， HSP47mRNA最大表达量为对照组的2.76倍，Ⅰ型胶原mRNA最大表达量为对照组的3.24倍。（3）5ng/ml TGF-β1刺激Tenon囊成纤维细胞，随着作用时间的延长，Tenon囊成纤维细胞HSP47和Ⅰ型胶原mRNA的表达增强，刺激48h后HSP47 mRNA表达为对照组的2.945倍，Ⅰ型胶原mRNA表达为对照组的3.14倍。

　　结论：TGF-β1可刺激Tenon囊成纤维细胞稳定诱导HSP47和I型胶原mRNA表达。文献报道青光眼滤过手术后，手术导致TGF-β1的增加，TGF-β1可能通过上调HSP47及I型胶原蛋白的表达，促进胶原合成。

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