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玻璃体切割术后视网膜前膜中Ⅰ、Ⅲ型胶原及fibronectin的表达

http://www.cnophol.com 2009-4-15 11:11:32 中华眼科在线

  2结果

    在光学显微镜下,两组的病变中均可见大量的平行、交叉、网状排列的胶原纤维,前膜中含有成纤维细胞、淋巴细胞和少数色素上皮样细胞,未见有新生血管(图1AC)。

  2.1Ⅰ型胶原

  在荧光显微镜下,可见大量线状、网状、团状的明亮红色荧光弥散分布。35例前膜中33例可检测到Ⅰ型胶原(33/35,94%)。黄斑前膜组Ⅰ型胶原阳性表达为14例(14/15,93%)(图2A),周边前膜组中Ⅰ型胶原阳性表达19例(19/20,95%)(图2B)。以PBS代替一抗的阴性对照片呈阴性(图2C)。两组比较,采用Fisher确切概率法进行统计,P=0.681>0.05,无显著性差异。

  2.2 Ⅲ型胶原

  在荧光显微镜下,可见大量线状、网状、团状的明亮红色荧光弥散分布。35例中21例检测到Ⅲ型胶原(21/35,60%)。黄斑前膜组Ⅲ型胶原阳性表达为14例(14/15,93%)(图3A),周边前膜组中Ⅲ型胶原阳性表达7例(7/20,15%)(图3B),以PBS代替一抗的阴性对照片呈阴性(图3C)。两组比较,采用Fisher确切概率法进行统计,P<0.01,有显著性差异。

  2.3纤维粘连蛋白

  在荧光显微镜下,可见线状、网状、团状的明亮绿色荧光弥散分布。35例中有29例FN阳性(29/35,83%)。黄斑前膜组FN阳性表达12例(12/20,80%)(图4A);周边前膜组中FN阳性表达17例(17/20,83%)(图4B)。以PBS代替一抗的阴性对照片呈阴性(图4C)。两组比较,采用Fisher确切概率法进行统计,P=0.519>0.05,无显著性差异。

  3讨论

    增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)增殖膜中有大量细胞外基质成分(ECM)沉积,包括胶原和一些非胶原糖蛋白成分[5,6]。胶原类型主要是Ⅰ,Ⅲ型胶原。Vidaurri等[7]发现胶原可刺激色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)移行和变形。用Ⅰ、Ⅲ型胶原共同培养RPE细胞,细胞由单层生长时的六边形、卵圆形变成长棱形,长入玻璃体或胶原内,成纤维细胞样,仍保持RPE细胞特征,形成桥粒,细胞分裂增生加快,说明胶原有改变RPE细胞表型促细胞增生的作用[7]。在细胞外基质的所有非胶原的糖蛋白中,纤维粘连蛋白是了解的最清楚的一种。它作为PVR增殖膜中ECM的主要成分之一,在增殖膜形成中起主导作用[8]。Campochiaro等[9]发现人血清RPE细胞具有趋化和增殖作用,其中细胞趋化增殖作用的大小与FN的浓度呈正相关。由此,他首先提出FN可能与PVR的发病机制有关。Casaroli等[8]用免疫组化染色技术发现增殖膜中有大量FN,且在疾病的不同时期分布有所不同:早期(病程少于2mo)多分布在细胞周围,用免疫电镜可观察到FN沿胞浆膜和胞浆突起分布;中、后期(病程大于2mo)则在基质中呈纤维状分布。随着病程进展,FN由弥漫性转为局限性,含量也减少(病程大于6mo)。已有研究表明,FN能识别和趋化成纤维细胞、巨噬细胞和RPE细胞,促进细胞增殖,并参与细胞骨架的形成。
   
  1987年,Glaser等[10]应用定时显微电影摄影技术成功地拍摄到RPE细胞与胶原纤维收缩的过程,提出PVR膜组织收缩方式同Lewis[11]所报道的一样,即:伸足突细胞拽拉其周围的胶原纤维发生收缩的过程,这一过程形如水手拉帆索绳一样“一把一把”地进行。王方等[12]采用电镜对视网膜表面膜的超微结构进行研究,发现FN分布于伸足突细胞与Ⅰ,Ⅲ型胶原接触区,故认为视网膜表面膜中上皮细胞来源的伸足突样细胞功能活跃,Ⅰ,Ⅲ型胶原密集分布于足突周围,且FN参与收缩过程。

    目前,关于PVR膜的收缩机制研究结果表明PVR膜的收缩是有收缩能力的细胞通过FN与胶原连接,将细胞的收缩传递到胶原来带动膜收缩。Ⅰ、Ⅲ型胶原及FN在膜收缩的过程中起着非常重要的作用。收集孔源性视网膜脱离玻璃体切割术后视网膜前膜标本35例,其中黄斑前膜15例,周边前膜20例。免疫荧光染色显示黄斑前膜组Ⅰ,Ⅲ型胶原阳性表达率均为93.3%,FN阳性表达率80%;周边前膜组中Ⅰ型胶原阳性表达率95%,Ⅲ型胶原阳性表达率15%,FN阳性表达率82.9%。两组比较Ⅰ型胶原、FN的阳性染色率无统计学差异(P>0.05);Ⅲ型胶原的阳性率P=0.001,在统计学上具有显著性差异。在本实验研究中,视网膜前膜中Ⅰ,Ⅲ型胶原、FN均有较高的阳性率,说明孔源性视网膜脱离玻璃体切割术前后产生的视网膜前膜发病机制类似,这3种细胞外基质成分可能在玻璃体切割术后视网膜前膜的收缩中同样起着重要的作用。它们是通过怎样的机制来影响玻璃体切割术后视网膜前膜的发生发展尚需深入研究。再者,本实验研究中两组比较,Ⅲ型胶原在黄斑前膜组的阳性表达率比周边前膜组高,有显著性差异。周边视网膜前膜的胶原成分主要是Ⅰ型胶原,根据纤维状胶原亚型在组织愈合的特点[13],提示周边前膜是一种非常成熟的膜,临床上确实也发现周边膜往往较致密。对创伤愈合研究表明,富含Ⅲ型胶原的基质比Ⅰ型基质收缩更明显[14]。据此推测,在孔源性视网膜脱离玻璃体切割术后发生的视网膜前膜,位于黄斑部者可能较之周边部者收缩能力更强,更容易形成牵引性视网膜脱离。

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(来源:首席医学网)(责编:zhanghui)

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