青光眼             3339                                      AB0602

    人神经营养素-4基因重组腺伴随病毒载体的构建、产生和滴度测定

    张华 赵家良

    北京协和医院眼科 100730

    目的  为了研究人神经营养素-4（hNT-4）导入青光眼模型的治疗作用，构建并产生重组腺伴随病毒载体。

    方法  将hNT-4目的基因插入载体质粒pSSHGCMV的EcoR I 和 BamH I位点之间，构建重组腺伴随病毒载体质粒。用腺病毒辅助质

粒pFG140代替野生型腺病毒，包装质粒pAAV/Ad及已构建重组腺伴随病毒载体质粒，三质粒磷酸钙共沉淀法转染80%融合的143细胞系

，包装rAAV。经蔗糖梯度离心法纯化、斑点杂交方法测定重组病毒滴度。

    结果  成功构建了重组病毒质粒pSSHGCMV/ hNT-4。用腺病毒质粒代替野生型腺病毒不影响重组病毒的产生和滴度，而且可以减

少野生型腺病毒的污染。用蔗糖梯度离心法离心获得rAAV，使用斑点杂交方法测定重组病毒滴度，杂交结果与已知浓度重组质粒杂交

结果比较，获得了较高滴度的重组病毒

    结论  成功制备了人神经营养素-4基因重组腺伴随病毒rAAV/ hNT-4，为青光眼基因治疗实验奠定了基础。

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