超声微泡介导基因在视网膜神经节细胞表达的体外实验研究

刘苏  熊海波  李伟

重庆医科大学附属第二医院眼科400010

目的：研究一种新方法以有效地转染绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)到视网膜神经节细胞，并转染Bcl-xl基因至视网膜神经节细胞以抗凋亡。

方法：在体外用超声破坏微泡介导绿色荧光蛋白基因转染到视网膜神经节细胞，以脂质体作为对照。对转染效果用显微镜及流式细胞仪进行定性和定量检测，采用MTT法测定细胞活力。用NMDA诱导视网膜神经节细胞凋亡的模型。超声微泡介导Bcl-xl基因在视网膜神经节细胞表达。免疫组化定量检测Bcl-xl蛋白水平，AO/EB(吖啶橙/溴化乙锭)双荧光染色检测细胞凋亡的形态特征，琼脂糖电泳检测细胞凋亡DNA片断。

结果：超声微泡可提高GFP基因转染率，其平均转染率为25%，超声和微泡两者均不影响细胞活性。Bcl-xl蛋白水平在转染和未转染视网膜神经节细胞有显着不同。治疗组凋亡小体更少，无明显的DNA“梯度”条带。

结论：超声微泡可以提高报告基因转染，是一种有效的视网膜基因转染方法。以此转染Bcl-xl基因至视网膜神经节细胞可有效发挥抗凋亡作用，这可能是一个有前途的基因治疗视网膜及视神经疾病的新方法。

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