【摘要】 目的 观察角膜移植患者外周血T细胞及其亚群CD 25 分子的表达。方法 应用流式细胞仪于手术前1天、术后第1、2、3、8周检测23例角膜移植患者外周血T细胞CD 25 分子表达。结果 角膜高血管化植床组患者术后外周血T细胞CD 25 分子表达比角膜无血管化植床组患者明显增高，也比术前明显增高(P<0.01)，6例发生过排斥反应的患者均在高血管化植床组，早期外周血中以CD +4 T细胞为主。结论 外周血T细胞CD 25 分子表达与角膜移植排斥反应密切相关，测定外周血中CD 25 分子表达可更早预见排斥反应的发生。

    角膜移植是治疗角膜疾病的有效手术，其失败的最主要原因是术后免疫排斥反应。据临床统计，在无血管植床者，排斥反应的发生率为5%～10%。而在高血管化植床或二次移植者，排斥反应发生率高达50% [1] 。CD 25 是IL-2Ra，自1979年BONNARD等人从体外培养的CTC(Human cultured T cell)上发现以来，对CD 25 进行了深入研究，证实CD 25 是促进T细胞活化的关键。最近又发现小鼠和人CD +4 CD +25 T细胞具有免疫调节功能 [2～5] ，但其作用机制尚未清楚。本文应用流式细胞仪检测角膜移植患者外周血T细胞CD 25 分子表达，分析CD 25 分子与排斥反应的相关性。

    1 资料与方法

    1.1 研究对象 23例部分穿透性角膜移植患者，其中男9人，女14人，年龄16～56岁。基本上排除了自身免疫性疾病、糖尿病和眼部葡萄膜炎。

    1.2 实验分组 依据角膜临床条件将患者分为两组:无血管植床组，8例;高血管化植床组，角膜有较多浅层或深层新生血管，15例。

    1.3 手术方法及术后处理 手术按临床上常规穿透性角膜移植步骤进行，环钻直径7.0～8.0mm，10-0尼龙线作连续或间断缝合。术后常规全身和局部使用地塞米松和抗生素，术后3～6个月拆线。发生排斥反应时，激素用量加大。

    1.4 术后观察 术后依据眼部睫状充血，角膜上皮、基质和内皮排斥线，角膜水肿和KP等体征判断有无发生排斥反应。分别与手术前1天，术后第1、2、3、8周从前臂静脉抽1ml肝素抗凝血，用于T细胞CD 25 分子表达测定。

    1.5 T细胞CD 25 分子表达标记分析 小鼠抗人荧光标记单克隆抗体Anti-CD 3 ·FITC、anti-CD 4 ·FITC、anti-CD 3 ·FITC，小鼠抗人anti-CD 25 和羊抗小鼠anti-IgG·PE购自美国BDIS公司。对外周血采用双色荧光单克隆抗体标记，全部数据应用流式细胞仪(FAC star puls.美国)和软件LysysⅡ进行分析。

    2 结果

    2.1 在半年观察期内，有6例患者发生了免疫排斥反应，均发生在高血管化植床组，其中4例经激素治疗后治愈，2例植片变混浊。

    2.2 术前无血管化植床患者或高血管化植床患者外周血T细胞CD 25 分子表达分别为15.2%和16.1%。术后两组患者外周血T细胞CD 25 分子表达均有不同程度的升高，但以高血管化植床患者增高明显，见表1、图1。术后同时期比较，高血管化植床患者外周血CD 25 分子表达明显高于无血管化植床患者(P<0.01)，术后第3周差异最大。术后高血管化患者CD 25 分子表达较术前也明显升高。

    表1 角膜移植患者外周血T细胞CD 25 分子表达 (略)

    2.3 对术后第3周数据分析，无血管化植床和高血管化植床患者外周血不同亚群T细胞CD 25 分子表达分别为:在CD +3 群体，分别为16.3%和27.4%;在CD +4 群体，分别为9.3%和18.6%;在CD +8 群体，分别为7.8%和8.3%，在CD +3 群体或CD +4 群体，两组之间差异有显著性，其中以CD +4 群体差异最明显，见表2。

    表2 角膜移植患者术后第3周外周血T细胞不同群体CD 25 分子表达 (略)

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