基础             1343                                      PO0124

　　抗血管内皮生长因子小干扰RNA抑制角膜上皮和基质细胞VEGF表达的研究

　　李瑾  范先群

　　上海交通大学医学院附属第九人民医院  200011

　　目的 研究血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）在正常角膜上皮、基质细胞以及羊膜为载体的培养角膜上皮细胞中的表达；探讨针对VEGF的双链小干扰RNA (small interference RNA, siRNA)对体外培养的角膜上皮细胞和角膜基质细胞VEGF表达的抑制作用。

　　材料和方法 体外培养大鼠角膜上皮和基质细胞，羊膜为载体构建角膜上皮，逆转录聚合酶链反应检测三组细胞VEGF-mRNA表达水平。设计和合成VEGF-siRNA，脂质体介导转染体外培养的角膜上皮细胞和基质细胞，实时荧光定量PCR法分别检测转染后各时段细胞VEGFmRNA表达水平，酶联免疫吸附实验分别测定转染后各时段VEGF蛋白表达水平。

　　结果  体外培养的角膜上皮细胞、基质细胞、以羊膜为载体体外培养的角膜上皮细胞均可表达VEGF mRNA，VEGF mRNA在角膜上皮细胞和以羊膜为载体的角膜上皮细胞中的表达量无显著性差异；VEGF-siRNA转染的角膜上皮细胞和基质细胞，其VEGF基因和蛋白表达水平明显低于相应对照组，72h抑制率分别为85%和78%。

　　结论  角膜上皮细胞和基质细胞通过分泌VEGF参与CNV形成，羊膜和以羊膜为载体的培养角膜上皮移植不能充分抑制VEGF表达；VEGF-siRNA能有效抑制体外培养的角膜上皮细胞和基质细胞的VEGF的表达。

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