角膜结膜及泪器病             1818                                      PO0285

　　自体角膜缘干细胞体外培养后移植的临床研究

　　何晓静 朱美玲

　　安徽医科大学第一附属医院眼科 230022

　　目的：建立人角膜缘干细胞体外培养模型；探讨单眼角膜缘干细胞缺陷患者自体角膜缘干细胞体外培养后再移植的临床疗效。

　　方法：从角膜移植存留的环状角膜缘组织上分离含有完整上皮细胞的2mm×2mm、厚约0.2mm的组织块数块，每个组织块剪切成4个1mm×1mm小组织块，经消化酶处理后置于无上皮细胞的人羊膜上采用含有20%胎牛血清的DMEM/F12培养基进行培养，共14天，隔日换液，每日使用倒置显微镜观察细胞生长情况，分别于第7、14天进行病理组织学和抗增殖细胞核单克隆抗体和广谱角蛋白抗体免疫组织化学检查。自单眼角膜缘干细胞缺陷患者的健眼上获取的2mm×2mm角膜缘组织块在体外以上述方法进行培养，待细胞形成多层时进行患眼自体移植，术后定期观察患者视力、角膜新生血管、角膜上皮完整性、角膜透明度。

　　结果：角膜缘组织块体外培养24小时开始贴壁，48小时可见细胞自组织块边缘爬行至羊膜上，此后细胞快速生长，至1周时，扩增的角膜缘上皮细胞出现汇合并牢固贴附于羊膜之上，2周时可形成4～5层。所培养细胞在第7、14天均对广谱角蛋白抗体和增殖细胞核抗原单克隆抗体呈阳性反应。单眼角膜缘干细胞缺陷患者自体角膜缘干细胞体外培养后再移植术后患者视力均有提高，角膜上皮细胞修复良好，角膜新生血管得到抑制，角膜透明度明显增加。

　　结论：以羊膜为底物的消化加组织块培养法培养的角膜缘上皮细胞既具有较高的增殖能力、短期内可形成多层，又可保持角膜上皮细胞的特性，所形成的细胞片可用于角膜缘干细胞缺陷患者。单眼角膜缘干细胞缺陷患者自体角膜缘干细胞体外培养后再移植既可解决角膜缘干细胞来源问题，又不会发生排斥反应，值得临床大力推广。

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