角膜结膜及泪器病             3117                                      PO0381

　　脱细胞角膜基质为支架构建组织工程角膜上皮的实验研究

　　房兴峰  赵靖  谢立信

　　山东省眼科研究所 266071

　　目的  比较角膜组织脱细胞的两种新方法，探讨以去细胞角膜基质为支架构建组织工程化角膜上皮的可行性。 

　　方法  分别用NaCl-SDS-胰蛋白酶法和Dispase-Triton-X-100法处理兔角膜组织，用裂隙灯显微镜和组织病理学方法观察经两种化学方法处理后，角膜基质的特性和脱细胞效果。刮除角膜上皮，以显微角膜刀切取猪角膜前弹力层/基质（厚度为150μm），用Dispase-Triton-X-100法作脱细胞处理。组织块培养法培养兔角膜上皮细胞，取兔角巩膜缘上皮组织接种于猪角膜去细胞后的前弹力层/基质支架上，体外重建兔角膜上皮细胞层，并进行形态学、组织病理学和免疫组织化学检测。 

　　结果  NaCl-SDS-胰蛋白酶法和Dispase-Triton-X-100法处理过的兔角膜基质大体形态相似，均呈灰白色不透明状，水肿明显，质地柔软，但后者柔韧性优于前者。组织病理学观察两种方法处理的兔角膜胶原排列规整，但是NaCl-SDS-胰蛋白酶法处理的角膜保留了部分基质细胞及细胞碎片，而Dispase-Triton-X-100处理的角膜未见基质细胞及细胞碎片。两种方法处理后经甘油脱水的角膜基质透明度均提高，厚度变薄，直径变小。以Dispase-Triton-X-100法处理猪角膜前弹力层/基质，结果与兔角膜发生相似的变化。兔角膜缘上皮组织块接种于脱细胞后的猪角膜前弹力层/基质上，24小时后，角膜上皮细胞开始游出，呈圆形或椭圆形，透亮，贴壁后呈不规则多角形，3-4天开始融合呈片状，7-8天形成单细胞层。免疫组化检测发现，角膜上皮细胞表达特异性角蛋白CK3与生理状态下相同。 

　　结论  利用Dispase-Triton-X-100法处理角膜组织脱细胞比较完全，胶原纤维排列规整，是一种良好的角膜去细胞方法。以脱细胞后的猪角膜前弹力层/基质为支架，培养角膜缘上皮细胞，可在体外构建组织工程化角膜的上皮组织。

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