青光眼             1940                                      PO0493

　　rAAV介导GFP基因转染家兔视网膜的实验研究

　　宋金鑫  王建明  王晶  宋艳萍  孙乃学  冯海晓  熊蕾  李霞

　　西安交通大学第二医院眼科 710004

　　目的：观察家兔玻璃体内注射重组腺伴随病毒介导的绿荧光蛋白基因（adeno-associated virus-green fluorescent protein gene, rAAV-GFP）后视网膜绿荧光蛋白（green fluorescent protein, GFP）的表达，探讨我们课题组构建的rAAV作为眼内基因转染载体的可能性。

　　方法：36只健康日本大耳白兔随机分为对照组和实验组。对照组家兔随机选取一眼为正常对照，不进行任何处理；另一眼为PBS对照，玻璃体内注射10μl PBS。实验组任选一眼为实验眼，玻璃体内注射10μl rAAV-GFP（病毒滴度为1×1011TU•L-1），对侧眼不观察。分别于注射后3d、7d、14d摘除眼球进行视网膜铺片，荧光显微镜下观察视网膜GFP表达并进行荧光强度分级。三组视网膜GFP表达进行比较。每个观察时间点6只家兔。

　　结果：正常对照组和PBS对照组家兔视网膜无GFP表达。实验组家兔玻璃体注射rAAV-GFP后第3天视网膜即可见较强的GFP荧光表达。随着观察时间的延长，实验组视网膜GFP荧光表达逐渐增强（P<0.05）。共焦显微镜观察表达的GFP位于细胞浆内。

　　结论：我们构建的重组腺伴随病毒（adeno-associated virus, rAAV）是一个可靠、简便易行的基因转移载体。绿荧光蛋白基因是一个良好的报告基因。

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