王薇

北京大学第三医院 北京大学眼科中心

目的：研究NMDA受体甘氨酸位点拮抗剂对视网膜缺血再灌注损伤后对视网膜神经细胞的影响及可能的作用机制。

方法：采用升高眼内压的方法建立大鼠视网膜缺血再灌注模型。将SD大鼠105只随机分为空白对照组，实验对照组和实验治疗组，其中实验治疗组根据再灌注后不同时间玻璃体腔注药分为1、3和6小时组。实验结束后24小时过量麻醉处死大鼠，取眼球。标本制作冰冻切片和提取视网膜神经细胞总RNA。采用HE染色，Hochest标记细胞核，Thy1.1、PKCα和Calretinin等抗体免疫荧光标记视网膜内神经节细胞、双极细胞和无长突细胞，用TUNEL法检测细胞凋亡。观察各组标本视网膜结构和内核层厚度变化。采用共聚焦显微镜定位凋亡细胞，并比较各组视网膜凋亡细胞数。实时定量PCR检测并比较各组标本视网膜Bax、Bcl-2、CAMKⅡ、COX1、COX4、Caspase-3和GRIN1的表达量。将大鼠开颅后注射荧光金对视网膜神经节细胞逆行标记，2周后采用升高眼内压的方法建立大鼠视网膜缺血再灌注模型。实验结束后24小时过量麻醉处死大鼠，取眼球。取视网膜铺片，用荧光显微镜拍照，计算并比较距视盘1/3视网膜直径处神经节细胞的数目。
结果：视网膜缺血再灌注损伤后视网膜水肿，变薄，凋亡细胞主要出现在神经节细胞层和内核层，其中包括神经节细胞，双极细胞和无长突细胞。治疗组视网膜内核层明显厚于实验对照组，凋亡细胞数显著少于实验对照组。实验对照组与实验治疗组的视网膜神经节细胞数量均少于空白对照组。实验治疗组中1小时和3小时给药组的视网膜神经节细胞显著多于实验对照组，而6小时给药组与实验对照组相比无显著差异。实验治疗组视网膜神经细胞Bax、CAMKⅡ、COX1、 COX4、Caspase-3和GRIN1的表达量显著低于实验对照组，而Bcl-2与Bax的比值则显著高于实验对照组。

结论： NMDA受体甘氨酸位点拮抗剂可抑制视网膜缺血再灌注模型中视网膜神经细胞的凋亡，减少视网膜神经节细胞丢失，从而保护视网膜神经细胞。其机制可能是通过下调NMDA受体重要功能亚基NR1的表达，降低细胞钙离子内流，从而抑制细胞凋亡。

关键词：甘氨酸位点拮抗剂；缺血再灌注；凋亡；NMDA受体

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