作者：刘东宁，刘哲丽
作者单位：1（100031）中国辽宁省沈阳市第四人民医院眼科；2（110001）中国辽宁省沈阳市，中国医科大学第一临床医院眼底病中心
【摘要】 目的：研究增殖性糖尿病视网膜病变（proliferative diabetic retinopathy ,PDR）视网膜增殖膜纤维化和新生血管形成与MMP-2和MMP-9异常表达的关系。
方法：采用免疫组织化学方法，检测PDR患者20例视网膜前纤维血管膜MMP-2和MMP-9的表达，并与增殖性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreoretinopathy ,PVR）10例非血管性增殖膜进行对比研究。
结果：PDR增殖膜MMP-2和MMP-9染色阳性率分别为70％和85％，PVR增殖膜MMP-2和MMP-9染色阳性率分别为80％和60％。在PDR增殖膜上可见血管周围基质MMP-9染色阳性，而且与PVR增殖膜相比，PDR增殖膜MMP-9表达有显著提高。
结论：PDR增殖膜MMP-2和MMP-9均有表达，在PDR新生血管形成和纤维化的病理过程中起重要作用。
【关键词】 基质金属蛋白酶；糖尿病视网膜病变；增生性；发病机制
Matrix metalloproteinases in fibrovascular membranes of proliferarive diabetic retinopathy
Dong-Ning Liu1, Zhe-Li Liu2
1Department of Ophthalmology, the Fourth People's Hospital, Shenyang 110031, Liaoning Province, China.2Ocular Fundus Diseases Center, the First Affiliated Hospital, China Medical University, Shenyang 110001, Liaoning Province, China
Abstract AIM: To examine the epiretinal membranes of proliferative diabetic retinopathy (PDR) for the presence of selective matrix metalloproteinases (MMP), in order to determine whether neovascularisation and fibrosis are associated with specific anomalies of MMP expression. METHODS: The presence of MMP-2 and MMP-9 was investigated in 20 fibrovascular epiretinal membranes of PDR, and the findings were compared with those observed in 10 avascular epiretinal membranes of proliferative vitreoretinopathy (PVR). Specimens were examined by immunohistochemical methods. RESULTS: The results showed that a large proportion of PDR membranes (>60%) stained for MMP-2 and MMP-9. A characteristic staining for MMP-9 was observed within the perivascular matrix of PDR membranes, and there was a significant increase in MMP-9 expression by PDR membranes when compared with PVR membranes. CONCLUSION: MMP-2 and MMP-9 both exist in human epireinal membranes of PDR and may play an important role in pathological processes leading to retinal neovascularisation and fibrosis.
· KEYWORDS: matrix metalloproteinases; diabetic retinopathy; poliferative; pathologic mechanism
0引言
增殖性糖尿病视网膜病变（proliferative diabetic retinopathy ,PDR）是糖尿病的常见并发症，也是主要致盲眼病之一，其特点是视网膜前新生血管和纤维血管膜的形成。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是一组降解细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的内源性蛋白酶系, 其中MMP-2和MMP-9是最主要的两个成员。已有研究表明，MMP-2和MMP-9与肿瘤浸润[1]、肝纤维化[2]以及新生血管形成[3]密切相关。我们采用免疫组化方法，检测PDR增殖膜MMP-2和MMP-9的表达情况，探讨其在PDR纤维化和新生血管形成过程中所发挥的作用，为进一步明确PDR的发生机制提供理论依据。
1材料和方法
1.1材料 鼠抗人MMP-2, MMP-9mAb；链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组化染色超敏试剂盒；胰蛋白酶试剂盒；DAB显色试剂盒；均为福建迈新生物技术开发公司产品。2002-05/2003-10住院增殖性糖尿病视网膜病变患者20例，增殖性玻璃体视网膜病变（poliferative vitreoretinopathy, PVR）患者10例，均为视网膜前表面增殖膜。正常视网膜来自2例死后12h内的角膜移植供体眼。糖尿病患者年龄45～65 (平均54.1)岁。糖尿病病史1/12～17（平均11.3）a，均为2型糖尿病。参照1984年我国眼底病学术会议指定的PDR分期标准，PDRⅤ期2例，PDR Ⅵ期18例。PVR(孔源性视网膜脱离合并PVR 6例，外伤性PVR 4例)患者年龄25～64(平均43.0)岁。病程0.5～12(平均5)mo。手术采用美国STORZ公司的玻璃体切割机，切割中后部玻璃体积血，用剥膜钩将视网膜表面增殖膜剥离，用玻璃体镊夹出。所有患者由2 名以上眼科医生诊断, 玻璃体切割手术由同一位医生施行。取出的视网膜增殖膜和正常眼球，立即用40g/L多聚甲醛固定，石蜡块包埋保存。玻片经多聚赖氨酸防脱片预处理，每个标本做4μm连续切片5张。所有切片先作HE染色，结构完整的增殖膜行免疫组织化学染色。
1.2方法 切片经烤片、脱蜡处理，采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶法（streptavidinperoxidase, SP）,按照试剂盒说明书步骤分别进行MMP-2和MMP-9的免疫组织化学染色。0.4g/L的3，3-二氨基联苯胺（3，3-diaminbezidine,DAB）显色，苏木素浅染，封片。阴性对照以PBS代替特异性第一抗体，其他步骤同前。在光镜下观察免疫组化染色切片，MMP-2和MMP-9以细胞质出现棕黄色颗粒为阳性,计算阳性率。每张切片在高倍显微镜下（400倍）随机选择5个视野，采用Metamorph/DP10/BX51图像分析软件，测量其平均灰度值。
统计学处理：用 表示,所得数据行t 检验， P <0.05被认为差别有统计学意义。
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