2结果

　　由视网膜组织的标准曲线可见RA浓度在10～150μg/L范围内有良好线性关系（r =0.9948，图1）。由脉络膜和巩膜组织的标准曲线可见RA浓度在10～100μg/L范围内有良好线性关系（r =0.9950，图2；r =0.9949，图3）。

　　2.1视网膜中RA的变化 正常眼视网膜中有RA的存在（图4A）；在形觉剥夺14d后,视网膜中RA含量明显增高(P <0.01)，形觉剥夺11d，去剥夺3d后,RA含量又明显下降(P <0.01),甚至降至低于对照眼的水平，各对照组间无明显变化(P >0.05，表1）。

　　2.2脉络膜中RA的变化 正常眼脉络膜中有RA的存在（图4B）； 形觉剥夺14d后,脉络膜中RA水平明显下降 (P <0.01),形觉剥夺11d，去剥夺3d后,RA水平又明显升高,可达剥夺眼RA水平的7倍,甚至是对照眼水平的2倍，各对照组间无明显变化,其差异无显著性（表1）。

　　2.3巩膜中RA的变化 正常眼巩膜中有RA的存在（图4C,D）；形觉剥夺14d后, 巩膜软骨层及巩膜纤维层中RA均明显下降(P <0.01) ，其中,纤维巩膜层中RA水平下降更为明显，去除形觉剥夺3d后, 巩膜软骨层和纤维层中的RA水平与各自剥夺眼相比,都有明显升高(P <0.01),且都高于对照眼的水平，剥夺眼中巩膜纤维层RA含量低于软骨层(P <0.01),而剥夺恢复眼中巩膜纤维层中的RA含量则高于巩膜软骨层中的含量(P <0.05，表1)。

　　形觉剥夺14d后视网膜RA含量明显增高，脉络膜RA水平明显下降，巩膜软骨层、纤维层RA含量也明显下降（图5A）。形觉剥夺11d，恢复3d，小鸡近视眼恢复组，视网膜RA含量恢复，并低于对照眼水平，脉络膜及巩膜RA含量回升，并高于其对照眼正常值（图5B）。

　　3讨论

　　视环境在眼屈光和眼轴的发育中起到了一个极其重要的作用。生后发育期间，正常的视环境能为眼提供所必需的信息，使眼达到正常的正视化的屈光状态；当剥夺了这一信息时，眼的前后径就会变长，与对侧的非剥夺的对照眼相比，会超过“适当”的眼轴长度，因而发展成近视。在视网膜和巩膜之间存在着信息传递途径。这已从鸡、猴及树鼠的实验中得到证实：（1）手术切除视神经并不能阻止剥夺性近视的产生，且正视化仍然还在进行，尽管并不完全正常[9]；（2）对视网膜的一部分进行剥夺仅在剥夺相对应的视网膜区域发生近视，并在局部相对应的区域发生形态学的改变[10]；（3）切除视皮层，破坏Edinger-Westphal核及除去睫状神经节等处理都不会阻止剥夺性近视的发生[11]。这些结果表明，在视网膜的局部控制下，视网膜能向其下面的巩膜发送生长信号，而在正常情况下，这种起源于视网膜的影响眼轴增长的信号一定要到达巩膜而并不离开眼球。从胚胎发生学上来看，神经网膜或视网膜色素上皮（Retinal Pigment Epithelium, RPE）能促使间叶组织凝结来形成脉络膜然后形成巩膜[12]，巩膜细胞是神经冲动传递通路的终端效应器。这也是视网膜和巩膜之间信息传递存在的组织学基础。 然而，这种信息传递是如何发生的并不清楚。据推测，其可能牵涉到一系列步骤，通过这一系列步骤，那些由视环境的改变（比如形觉剥夺或去剥夺）引发的信号可能会在视网膜、脉络膜和巩膜中发生相应的变化。这一信号传递受24h周期和/或光亮/黑暗循环所影响。最近据报道，视黄酸可能与之有关[13,14]，另外，ZENK基因[2]及多巴胺系统也可能与之有关。本研究结果表明，鸡的视网膜和脉络膜及巩膜组织中，均有视黄酸的存在，脉络膜中含量最高，巩膜次之（巩膜纤维层中的含量高于巩膜软骨层），视网膜中的含量最低。这与Mertz等[15]及Seko等[5]的结果相似。形觉剥夺14d后，视网膜中的RA水平明显升高, 而脉络膜和巩膜中的RA水平明显降低，巩膜纤维层中RA水平的下降比软骨层更为明显。形觉剥夺11d，去除剥夺3d后，视网膜中RA 的水平下降，而脉络膜和巩膜组织中的RA水平明显升高，其中，RA在纤维巩膜中的升高更为明显。因此，不论是形觉剥夺还是去剥夺，巩膜与脉络膜中的RA变化方向一致，而与视网膜中的RA变化方向相反。本实验结果揭示视环境的改变强烈地影响着视网膜、脉络膜和巩膜中RA水平的变化，提示RA参与了FDM的形成。

　　由于FDM形成中，RA在视网膜中含量的变化与脉络膜、巩膜中的变化方向相反，且视网膜中合成的RA不可能通过有着高速血流和大量血管的脉络膜而到达巩膜组织来起作用。因此，进一步提示了RA是作为一种信使物质来起作用。可能是，形觉剥夺使视网膜中RA合成增加，其作为一种信号分子来引起一系列信号串联反应，调节脉络膜和巩膜中RA含量的变化，使其水平下降。已有研究表明，视黄酸对巩膜的发育和代谢具有重要影响[14-16]，其可称为一种主要的分化因子，因它可诱导一些生长因子和它们受体的表达，激活细胞分化的早期事件并进一步诱导特异环境下的细胞分化过程[8]，因而RA可能就是改变的视觉条件和随之而来的眼球长度变化的主要中介物，其通过调节巩膜细胞的生长分化，最终导致眼轴伸长，近视形成。相关的、确切的机制还有待于进一步探讨。我们还发现，当形觉剥夺或去形觉剥夺，即视环境变化时，巩膜纤维层和软骨层中的RA水平都发生了明显变化,其中巩膜纤维层中RA的变化要比软骨层中的明显,表现为形觉剥夺后,其RA水平的明显下降和去除剥夺后的明显升高。Marzani等[17]的研究报道，将正常巩膜软骨层组织与从形觉剥夺或形觉剥夺恢复眼中分离出的纤维巩膜一同培养发现，其巩膜软骨层的生长反应，与在体的形觉剥夺眼或恢复眼巩膜软骨层中的表现相似。基于这一点，提出巩膜软骨层可能仅需对巩膜纤维层作出反应，而纤维层巩膜可能是唯一的对外界信号作出反应的巩膜。如果是这样的话，则FDM中，小鸡巩膜软骨层的改变完全可以看作是一种继发于巩膜纤维层的反应。人的巩膜与小鸡巩膜纤维层变化相似。因此，可用FDM中鸡巩膜纤维层的变化机制来探讨人类近视的机制。相关的机制也有待于进一步研究。我们从RA这一生物活性物质角度初步探讨了其在FDM形成中的作用。通过我们的实验，证实了RA参与了FDM的形成。但FDM中，视网膜、脉络膜、巩膜中RA 的确切作用还有待进一步明确。我们认为视网膜中的RA不会直接作用到巩膜组织，它起到的是一种信号转导的作用。但目前只是理论上其具有合理性，即理论上的推测，还需要更确切的实验来证实。参与RA信号转导的信号分子还有哪些？与目前公认的一些视网膜上的信使物质如多巴胺、乙酰胆碱、胰高血糖素等之间的作用关系如何？所有这些问题还需要进行更为深入的、系统的研究来解决。

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　　15 Mertz JR, Wallman J. Choroidal retinoic acid synthesis: A possible mediator between refractive error and compensatory eye growth. Exp Eye Res ,2000;70:519-527

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　　17 Marzani D, Wallman J. Growth of the two layers of the chick sclera is modulated reciprocally by visual conditions. Invest Ophthalmol Vis Sci ,1997;38(9):1727-1739

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