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2结果
2.1 H2O2处理后晶状体上皮细胞形态变化
光学显微镜观察,未经处理的细胞为多角形,在未汇合处呈长条形或梭形,已汇合细胞更加规则,呈近似六边形;细胞胞质透明,胞核及核仁可见。低浓度H2O2处理组细胞形态与未处理组无明显差异。100μmol/L及1mmol/L H2O2组则有明显不同，在H2O2处理后，细胞形态迅速发生变化，出现皱缩、轮廓增强、边缘僵硬，随着培养时间的推移，细胞形态无明显恢复，尤其是1mmol/L H2O2处理组。
2.2不同浓度的H2O2对晶状体上皮细胞增殖活力的影响
用MTT比色法检测不同浓度的H2O2对细胞增殖活力的结果显示，在低浓度范围（1nmol/L～10μmol/L）H2O2刺激细胞增生，在6，12和24h各时间点上细胞的增殖力均高于无H2O2对照组，而且有明显的剂量依赖趋势，在10nmol/L H2O2组出现细胞增殖高峰（图1），而在高浓度（1mmol/L和100μmol/L）H2O2处理组，晶状体上皮细胞增生活力均低于对照组（图1），结合对细胞形态的观察结果，我们发现高浓度H2O2抑制细胞增生甚至引起细胞死亡。进一步分析可以看出，在不同时间点上H2O2对细胞的增殖活力影响的程度不尽相同。在6h时，不同浓度H2O2对晶状体上皮细胞增殖活力影响的差别最大，随着培养时间的延长，各组之间的差异逐渐减小(图2)。1nmol/L～10μmol/L H2O2引起细胞增殖力的变化在6h时是对照组的1.51±0.29～2.88±0.13倍，在12h时是对照组的1.54±0.41～2.29±0.61倍，在24h时是对照组的1.42±0.76～2.01±0.86倍。在高浓度（1mmol/L和100μmol/L）时，各时间点细胞的增殖活力均低于正常对照组，仅是对照组的0.46±0.27～0.78±0.14倍（图2）。
2.3不同浓度的H2O2对晶状体上皮细胞分泌VEGF的影响
VEGF ELISA检测结果显示，低浓度（1nmol/L～10μmol/L）H2O2刺激可刺激人晶状体上皮细胞分泌VEGF，与对照组相比VEGF分别是它的1.24±0.15～1.51±0.22倍，峰值在10nmol/L（1.49±0.18倍）和10μmol/L（1.51±0.22倍）处，均与对照组有显著差异（P<0.05）。而在100μmol/L及1mmol/L处理组VEGF表达量与对照组无显著差异，而且明显低于10nmol/L组（P<0.05，图3）。H2O2刺激VEGF分泌的剂量范围与它刺激晶状体细胞增殖的剂量范围一致。
3讨论
我们的研究结果显示，H2O2在1nmol/L ～10μmol/L的可促进晶状体上皮细胞增殖，而在100μmol/L～1mmol/L则抑制细胞增生；在1nmol/L～10μmol/L H2O2能刺激晶状体上皮细胞产生VEGF，在10nmol/L和10μmol/L时VEGF的量最高，而在100μmol/L和1mmol/L时无VEGF产生。提示低剂量的H2O2刺激晶状体上皮细胞产生VEGF，同时促进培养的晶状体上皮细胞增生。
H2O2对晶状体上皮细胞的增殖活力有明显的影响。低浓度的 H2O2刺激可促进晶状体上皮细胞增殖，且以10nmol/L刺激增生效应最显著。而高浓度的H2O2可以导致细胞毒性，引起细胞死亡，这与以往的研究结果相似[11]。尚不致细胞毒性浓度的H2O2是一种信号转导分子[12]。H2O2可能通过其信号分子作用，向细胞传达某种促增殖信号，促进晶状体上皮细胞增殖。研究发现，H2O2可促进生长因子受体的磷酸化[13],推测H2O2可能会引起晶状体上皮细胞分泌某些生长因子，从而促进细胞增殖。已有研究报道低剂量的H2O2刺激晶状体上皮细胞产生CTGF[3]和LEDGF[4]，但对它们所引起的细胞生物学效应尚未见进一步报道。关于VEGF，有研究显示在缺氧条件下，小鼠晶状体上皮内VEGF的表达增高[14]，尚没有H2O2对晶状体上皮细胞VEGF表达影响的报告。我们的研究显示，低剂量H2O2不仅能可刺激晶状体上皮细胞产生VEGF，而且在相近的H2O2剂量范围内也刺激晶状体上皮细胞增生，提示低剂量H2O2可能通过刺激VEGF分泌引起细胞增殖。
本研究显示高浓度的H2O2使细胞的增殖能力下降，与此对应的H2O2没有刺激VEGF的高表达，表现出高浓度H2O2对细胞的毒性作用。
已有研究发现VEGF可上调脐静脉内皮细胞表达谷胱甘肽及谷胱甘肽过氧化物酶从而增加脐静脉内皮细胞的抗氧化能力[15]；VEGF可促进Ｍüller细胞增殖，对其有保护作用[16,17]；在晶状体上皮细胞VEGF可引起ERK的磷酸化水平增加[18]。我们推测VEGF可能通过ERK介导的信号转导途径影响细胞增殖能力和抗氧化能力。
氧化应激在白内障的形成起着重要作用，本研究结果提示氧化应激可能通过诱导晶状体上皮细胞产生VEGF而引起晶状体上皮细胞的功能变化，这对探讨白内障的发生机理可能是一个新的切入点。
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