作者：杜红艳，杜鹏程
作者单位：010017)中国内蒙古自治区呼和浩特市,内蒙古自治区医院眼科;2(014010)中国内蒙古自治区包头市,包头医学院一附院眼科
【摘要】 目的:探讨急性前葡萄膜炎(acute anterior uveitis,AAU)与人类白细胞抗原（human leucolyte antigen,HLAB27）的相关性。方法:应用聚合酶链反应（sequence special prime polymerase chain reaction,SSPPCR）基因检测技术，对AAU患者进行HLAB27基因检测，观察HLAB27阳性与阴性AAU临床特征并加以分析。结果:在36例AAU患者中，HLAB27抗原阳性29例，阳性率81%，37例健康对照组，阳性9例，阳性率24%，两者有显著性差异（χ2=23.12,P＜0.01）。结论：HLA B27与AAU明显相关，HLAB27阳性与阴性患者有一定程度的差异，常伴有全身脊柱关节病，采用SSPPCR基因检测技术测定HLAB27快速、简单、准确性高、客观性强，值得推广应用。
【关键词】 HLAB27;多聚合酶链式反应;急性前葡萄膜炎
Association between HLAB27 antigen and acute anterior uveitis
HongYan Du, PengCheng Du Department of Ophthalmology, Inner Mongolia Autonomous Region Hospital, Huhhot 010017, Inner Mongolia Autonomous Region, China; Department of Ophthalmology, the First Affiliated Hospital of Baotou Medical College, Baotou 014010, Inner Mongolia Autonomous Region, China
AbstractAIM: To evaluate the association between HLAB27 antigen and acute anterior uveitis. METHODS: The method of sequnce special primepolymerase chain reaction (SSPPCR) was used to detect HLAB27 from patients with acute anterior uveitis (AAU). And a clinical conparison was performed between HLAB27 positive and negative patients group. RESULTS: In 36 patients with AAU, 29 patients (81%) were with HLAB27 gene and 9 patients (24%) of 37 normal objectives were with HLAB27 gene. The difference between two groups was significant (χ2=23.12, P＜0.01). CONCLUSION: The results reconfirm previous speculation that AAU is in close association with HLAB27. The method of HLAB27 gene typing by SSPPCR is more rapid inexpensive and exact than the old method. Further analysis also indicats that there are some differences between HLAB27 positive AAU based on their cinical features.
KEYWORDS: HLAB27; sequnce special primepolymerase chain reaction; acute anterior uveitis
急性前葡萄膜炎﹙acute anterior uveitis，AAU）是一类常见的自身免疫性致盲眼病[1]，病因复杂、病程长、易反复发作。Brewerton等于1973年首次发现人类白细胞抗原（human leucolyte antigen,HLAB27）与AAU密切相关[2]。有研究表明HLAB27相关性前葡萄膜炎约占AAU的40.70%[2]，为探讨其临床特点，我们应用聚合酶链反应（sequence spectal prime polymerase chain reaction,SSPPCR）对36例AAU患者和37例健康对照者血液中HLAB27抗原进行测定，并对HLAB27抗原阳性和阴性AAU患者的临床特征加以分析，现将结果报告如下。
1对象和方法
1.1对象 收集2006 09/200712就诊的前葡萄膜炎患者36例，男33例，女3例，年龄20～62（平均40±11）岁，首诊时抽取静脉抗凝血3mL供检。37例健康人为对照组，男25例，女12例，年龄21～60（平均40.5）岁，并对HLAB27抗原阳性和阴性AAU患者的临床表现进行分析。主要试剂：（1）引物(美国Biosynthesis公司合成):特异性引物碱基因组成为5′CAGTCTGTGCCTTGGCGTTGGC3′和5′GCTACGTGCGACACGC3′(扩增段为144bp);以类生长激素(HGH)基因特异性引物为内对照:5′GCCTCCCAACCATTCCCTTA3′和5′TCACGGATTTCTGTTGTGTTT3′(扩增产物为429bp)。（2）其它试剂:蛋白酶K(Sigma公司);Taq DNA聚合酶;dNTP;100bp landder DNA和小分子DNA marker(北京中山生物技术有限公司)。主要仪器：PCR扩增仪、电泳仪及紫外检测仪由内蒙公安厅刑事技术科学研究所提供。
1.2方法 参照Olerup等的方法,取抗凝全血1.0mL,用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞,用蛋白酶K消化淋巴细胞,酚仿醇抽提,乙醇沉淀等步骤提取DNA,溶于无菌三蒸水中置20℃储存备用[3]。参照Olerup等的方法,采用SSP
PCR方法合成一对HLAB27 7个等位基因组的特异性引物[3]。PCR反应体系包括50～70ng的基因组DNA,1μL的聚合酶,引物各0.5,200μmol/L的dNTP及聚合酶缓冲液,循环条件94℃,1min;58℃,40s;72℃,50s共35个循环,产物长度为144bp。PCR产物检测:扩增产物在20g/L琼脂糖凝胶上(含溴化乙锭)电泳,电压5V/cm,电泳1～1.5h,紫外检测仪观读结果并拍照记录。实验组所有的病例均行骶髂关节及腰椎X线摄片,对X线有疑问者进行CT或MRI检查。并根据1984年修定的纽约强直性脊柱关节病的诊断标准进行诊断[4]，同时进行临床观察和分析。详细询问病史、常规裂隙灯、眼底镜、间接镜检查。血沉、C反应蛋白检查，以便发现伴有全身病变。
统计学分析：所有数据由SPSS 11.0统计软件处理。推断两个或多个总体率或总体构成比之间有无差别,两种属性或两个变量之间有无关联性,以及频数分部的拟合优度检验等用χ2检验(chisquare test)。
2结果
2.1 HLAB27阳性结果判断 具有HLAB27基因的样本经PCR扩增出现 144bp特异性区带及492bp内对照带,无HLAB27基因者只出现492bp内对照带。
2.2 AAU患者实验组与正常对照组HLAB27基因阳性率36例患者经SSPPCR方法检测,29例HLAB27基因呈阳性,阳性率81%;37例(对照组)中9例HLAB27基因呈阳性，阳性率24%,经χ2检验,χ2=23.12，P＜0.01,两组间差异有显著性差异。
2.3 HLAB27阳性与阴性AAU患者临床特征 HLAB27阳性AAU患者眼部表现：起病急、单眼发病，KP均为细小灰白色，前房有纤维渗出。其中6例继发青光眼，4例并发白内障，5例虹膜粘连，10例玻璃体混浊，3例黄斑囊样水肿，伴发强直性脊柱炎29例，溃疡性结肠炎3例。HLAB27阴性AAU患者，未见脊柱关节病变。
3讨论
3.1采用PCR方法检测HLAB27基因型的优点 HLA抗原系统是当今发现最具多态性抗原系统，随着分子生物学技术的发展及其在HLA研究中的应用，特别是对所有HLA基因进行顺序分析，推动了HLA与疾病关联的分子机制研究，尤其是近年来随着基因检测技术的发展，采用SSPPCR技术进行HLAB27 基因检测，这比以往血清血方法检测要先进，表现在：（1）采用PCR技术，可以扩增HLAB27全部等位基因含内对照引物，确保结果可靠。（2）仅需少量血样，提取的DNA保存数年以供复核。（3）快速，4h可出结果，适用于临床，值得推广应用。（4）结果避免了主观人为因素影响。（5）试剂内含成品易于统一化和标准化。
3.2急性前葡萄膜炎与HLAB27的相关性[5] HLA抗原系统是当今发现最具有多态性的抗原系统，是一组存在于有核细胞表面的分子，由第6对染色体短臂上的主要组织相容复合物（major histocompitibility complex, MHC）所决定，分A、B、C、D、DR、DP和DQ 7个位点。自1973年Brewerton等首次报道AAU与HLAB27相关以来[1]，迄今为止，已发现20多种眼病与HLA相关[2]，其中最主要的是HLAB27与AAU之间的相关性。国内外报道有所不同，国内报道37.0%～60.0% AAU患者HLAB27呈阳性，国外报道19%～88%呈阳性[6]。我们采用SSPPCR方法检测，36例AAU患者HLAB27阳性率81%，对照组HLAB27阳性率24%，两组有非常显著性差异（χ2=23.12，P＜0.01），与国外报道相一致。HLAB27阳性患者主要临床特征：起病急、前房内有大量纤维渗出和细胞，多个细小、灰白色KP，单眼或双眼先后发病，复发率高，常伴有玻璃体混浊，黄斑囊样水肿，并发性白内障或继发性青光眼，而HLAB27阴性AAU患者无以上特点。
3.3 AAU与HLAB27抗原相关性的临床意义 关于HLAB27与疾病的相关性以强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis, AS）最高，有报道HLAB27阳性率高达96%[7]，而正常人的阳性率仅为7%～14%[8]，因此检测HLAB27抗原是诊断AS的重要依据，但确诊AS不需骶髂关节证实。HLAB27抗原检查不仅有助于对AAU患者进行临床分型判断预后和提示可能伴有脊柱关节病，而且为探讨AAU病理机制有着重要的临床意义，为基因治疗AAU开辟了广阔的前景。
【参考文献】
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3 Power WJ, Rodriguez A, PedrozaSeres M, et al. Outcomes in anterior uveitis associated with the HLAB27 haplotype. Ophthalmology1998;105:16461651
4杨培增.临床葡萄膜炎.北京:人民卫生出版社2004:311318
5车选义,马勇,李裕钦,等.急性前葡萄膜炎的HLAB27阳性与阴性患者的临床对比,国际眼科杂志2006;6(2):404 406
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