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3讨论
细胞骨架主要由微丝、微管和粗细介于两者之间的中间纤维组成。小梁网房水流出通道上的各种细胞均含有大量的微丝、微管和中间纤维，特别是小梁细胞和Schlemm管内皮细胞。微丝由收缩蛋白(肌动蛋白和肌球蛋白)、连接蛋白(α捕肌动蛋白和纽带蛋白)和调节蛋白(原肌球蛋白和钙调节蛋白)3种蛋白组成;主要存在于细胞质中,从核膜向周围分布或沿质膜分布,呈网状。在肌肉和非肌肉细胞中微丝是参与细胞结构和收缩功能的重要成分。微管是由α管蛋白、β管蛋白和少许微管结合蛋白组成;存在于细胞肌质内，组成中心粒、纤毛或绒毛等。微管参与维持细胞形态、有丝分裂、轴浆运输等多种功能。中等纤维由5种蛋白组成:角质纤维蛋白、波形纤维蛋白、结蛋白、胶原纤维酸性蛋白和神经纤维蛋白;它位于细胞核膜周围,与核内骨架相连。中等纤维在细胞的形态与维持、胞内支撑、细胞的位移和铺展、胞内颗粒的运动、细胞之间的连接,细胞器和细胞核的定位等方面起着重要作用。小梁细胞内细胞骨架成分丰富而明显。小梁细胞具有一定的收缩功能，细胞骨架的含量及成分对小梁细胞形态和收缩极为重要,细胞骨架含量、成分改变及质量异常等均可使小梁网细胞形态发生改变，从而影响小梁网的收缩和伸展,影响小梁网的网眼大小,影响房水的流出[4]。
我们选择细胞骨架中最重要的两个结构微丝和微管作为研究指标。从对以往文献的研究，我们得知肌动蛋白微丝的形态及其可能的变化都具特殊性，因此我们侧重于研究其形态变化。而a微管蛋白形态的可能变化不明显，因此我们侧重于研究其量的变化。大麻素的主要受体有2种：CB1受体和 CB2 受体[5,6]。Stamer等[7]在牛及人眼的睫状突和小梁网中证实了CB1mRNA及其蛋白的存在。对眼内压有影响的睫状突与小梁网均存在CB1受体，说明大麻素可以通过CB1受体对眼内压起调节作用。
本研究结果显示，通过一定质量浓度的AEA作用后，牛眼小梁细胞肌动蛋白纤维断裂变短；排列紊乱，稀疏。α微管蛋白的量呈浓度依赖性降低。细胞间隙扩大, 细胞容易从爬片上脱落，细胞变圆,突起减少,细胞间连接受到破坏。提示AEA可能通过破坏细胞骨架而降低细胞间、细胞与细胞外基质的黏附性,造成细胞分离和小梁细胞的丢失；可能通过改变肌动蛋白微丝的聚合状态及微管的量，引起细胞舒张,改变细胞形态。
AEA 降低眼压的可能机制:肌动蛋白细胞骨架结构能影响细胞形态,改变外流通路松弛度和引流路径,影响房水外流阻力[8] 。既往关于肌动蛋白降解剂降眼压的研究证实了这一点。例如，一些直接或间接的肌动蛋白裂解物质,如丝氨酸 苏氨酸激酶抑制剂H7 和latrunculinA/B 均可有效地降低眼压增加房水流出易度[ 9,10],组织学研究表明, H7可使小梁组织形态和结构改变,如细胞松弛、近管旁区域扩展、Schlemm管扩张和内壁前突而减少房水流出阻力[11]。细胞骨架也可以影响细胞与细胞间连接、细胞与细胞外基质的黏附作用,引起细胞信号传导改变,而影响房水外流[12,13] 。细胞外基质的降解以及细胞间黏附性的下降也会增加房水外流的通畅性,有降低眼压的作用[14]。根据本实验结果，我们推测在小梁细胞中, AEA通过降低细胞与细胞外基质黏附性,增加细胞的丢失量;改变肌动蛋白微丝细胞骨架,使细胞舒张变圆;从而扩大细胞间隙,增加房水外流的通畅性，降低眼压。
大麻素降眼压的具体机制目前还不清楚。最近的研究显示CB1受体在大麻素的降眼压中有重要的作用[1517]。Lograno等[18]发现AEA和CP55，940可能是由CB1受体激活G偶联蛋白信号途径发动的，通过磷脂酶C介导而增强牛眼睫状肌的收缩。睫状肌的收缩可引起小梁网的被动扩张使房水流出通道加宽，从而降低眼压。Zhou等[19]发现大麻素可通过CB1受体，依赖cAMP途径而改变细胞的形态和细胞骨架。Stamer等[20]发现大麻素在体外试验中可以激活异源三聚体G蛋白和导致cAMP的聚集。由此我们可以推测AEA可能是由CB1受体激活G偶联蛋白信号途径发动的，通过cAMP途径把信号传向胞内肌动蛋白微丝，通过肌动蛋白微丝的组装、重组以及将信号向更深入的方向传递,引起胞浆pH值、钙离子浓度、蛋白磷酸化以及基因诱导等一系列改变, 从而实现细胞移动、黏附及形态变化等。通过本试验，我们认为作为影响细胞骨架药物的大麻素可改变细胞形态，破坏细胞间的连续性，利于房水外流，而降低眼压。但其引起眼压下降的具体机制到目前为止并不清楚，需要我们进一步探索。
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