Relationship between the Apolipoprotein E Promoter Polymorphisms and the Risk of Age_related Macular DegenerationSHAO Yun_liang1，QIN Yan_li1，YI Xiao_guang1，SONG Yue1，YAN Yi_nong2（1STU/CUHK Joint Shantou International Eye Center，Shantou 515041，China;2Zhanjiang ALLAD Eye Center， Zhanjiang 524043，China）
［Abstract］Objective: To study the relationship between apolipoprotein E(APOE)promoter(_219G/T)polymorphisms and the risk of age_related macular degeneration(AMD). Methods: APOE _219G/T genetype in AMD group(50 cases)and control group(95 persons)was identified by polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism genotyping technique. Results: No significant difference was found between two groups on the distribution of APOE _219G/Tgenotype. Conclusion: The APOE _219G/T polymorphisms do not contribute to AMD risk.
［Key Words］age_related macular degeneration；apolipoprotein E；polymorphism
在西方发达国家，年龄相关性黄斑变性(AMD)是导致老年人视力严重损害甚至失明的一种常见疾病，病理学研究发现它的发生与异常脂肪代谢及转运相关。遗传学的研究证实它的发生与载脂蛋白E(APOE)基因密切相关［1，2］。APOE蛋白是神经系统重要的转运蛋白，APOE基因及基因启动子(_219G/T)具有多态性,启动子的突变显著降低APOE基因的表达并进而影响APOE蛋白的功能［3，4］。目前还未见有关APOE基因启动子多态性与AMD发病危险性关系的报道，本研究旨在用聚合酶链反应_限制性片段长度多态性(PCR_RFLP)分析法探讨APOE基因启动子多态性与AMD发生危险性的关系。
1资料与方法
1.1一般资料根据AMD诊断标准［5］选取AMD 50例(AMD组，男性22例，女性28例。年龄最小55岁，最大78岁，平均65岁)和对照组95例(来自排除眼底病的白内障患者及其他眼科患者。男性45例，女性50例。 年龄最小58岁， 最大82岁， 平均68岁)。
1.2方法抽两组空腹静脉血3mL，-80℃冻存。用DNA试剂盒(QIAamp DNA mini kits)从200μL血中提取DNA。用引物(正向：5′_AGAATGGAGGAGGGTGTCCG_3′，反向：5′_ACTTGTCCAATTATAGGGCTCC_3′)扩增包括_219G/T位点的目标DNA片段，PCR反应条件：变性温度94℃，40s，退火温度58℃，60s，延伸温度72℃，40s共35个循环。用NadⅡ酶对包含_219G/T位点碱基片段进行酶切，温度37℃，时间3h。用质量分数12%的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)对酶切产物进行电泳，电压250mV，时间40min。溴乙啶染色凝胶5min，紫外线灯下观察并拍照。
2 结果
两组间不存在APOE基因 _219G/T基因型频率分布的差异(χ2=185，df=2，P>039)(表1)。两组PCR_RFLP检测结果见图1。表1两组APOE基因 _219G/T多态性分布
3 讨论
AMD是涉及视细胞、视网膜色素上皮细胞、脉络膜的一种疾病。弥散性drusen、软性drusen、脉络膜新生血管、盘状瘢痕是AMD的4个病理特征［6］。临床上Drusen被看作是AMD发展的一种风险因子，用组织化学的方法也证实drusen中有磷脂和中性脂肪的存在。APOE基因位于19q132，含4个外显子和3个内含子，共有3个(ε2、ε3和ε4)等位基因，并由此产生6种基因型。APOE是含有299个氨基酸的磷脂糖蛋白,是组成脂蛋白的重要成分，其在调节脂质代谢、维持胆固醇平衡方面起着重要作用，同时也参与神经系统的正常生长和损伤后的修复过程。研究显示，不同APOE基因型与AMD发生危险性之间密切相关，APOE基因的ε2对AMD发生有促进作用,而ε4对AMD发生有保护作用［1，2］。研究还发现APOE基因启动子的3个(_491A/T,_427T/C,_219G/T)位点具有多态性，而APOE基因启动子碱基的突变可显著降低APOE基因的转录,进而影响APOE蛋白的功能［3_4］。本文探讨了APOE基因 _219G/T位点多态性与AMD发生危险性，结果提示无论GG、GT还是TT，两组间均无统计学意义，APOE基因的启动子区域_219G/T多态性可能并不参与构成AMD的发病风险，_219G/T的多态性对AMD的发生可能无关。这与APOE基因启动子的多态性在老年性痴呆症发生、发展中起不同作用［7］，同时我们的结果也间接印证了Haddad等［8］的观点，即APOE基因可能在AMD的发病机制中起次要作用。AMD的发生与环境因素(吸烟，饮食习惯、慢性光损害)及遗传因素(APOE,ABCR和ARMD1基因)有关。最近的研究也证实补体因子H、PLEK_HA1/LOC387715、BF/C2区域可能是导致AMD发生的主要区域［8～10］，未来我们将就这些新发现的基因及位点在AMD发病机制中的作用作进一步的探讨。
【参考文献】
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