【摘要】 目的 研究司帕沙星家兔口服后在其眼组织的分布及药动学。方法 给家兔灌服司帕沙星，不同时间点采集眼内各组织标本。以高效液相色谱法测定眼内各组织中的药物浓度，用3p97程序计算药动学参数。结果 给药后泪液、角膜、房水、虹膜睫状体、晶状体4.0h达峰，玻璃体6.0h达峰。司帕沙星在泪液、角膜、房水、虹膜睫状体、晶状体、玻璃体组织中cmax分别为(13.75±1.36)、(3.25±0.32)、(2.06±0.14)、(3.41±0.26)、(1.62±0.13)和(2.18±0.18)μg/ml；各眼组织中t1/2β分别为(8.18±0.70)、(9.94±3.90)、(5.05±0.66)、(13.54±6.37)、(5.67±1.15)和(3.60±1.23)h；AUC0～t分别为(118.68±5.64)、(28.18±5.42)、(17.52±2.09)、(36.77±10.47)、(16.12±0.59)和(16.57±0.47)(μg·h)/ml。结论 司帕沙星家兔口服后在眼内各组织中分布广，浓度较高，可替代治疗眼病时肠外给药。
【关键词】 司帕沙星； 兔； 组织分布； 药动学； HPLC
ABSTRACT Objective To study distribution and pharmacokinetics of sparfloxacin in ocular tissues after oral administration in rabbits. Methods Ocular tissues samples were taken in different times after oral administration inrabbits. The concentrations of sparfloxacin in ocular tissues were determined by HPLC. The pharmacokinetics parameters were calculated by 3p97 soft ware. Results The peak time of lacrimal fluid, cornea, aqueous humor, irisciliary body and lens was 4.0h after oral administration, and that of vitreous body was 6.0h. The peak concentration in lacrimal fluid, cornea, aqueous humor, irisciliary body, lens and vitreous body was (13.75±1.36)μg/ml, (3.25±0.32)μg/g, (2.06±0.14)μg/ml, (3.41±0.26)μg/g, (1.62±0.13)μg/g and (2.18±0.18)μg/ml respectively; halflife time in various tissues was (8.18±0.70)h, (9.94±3.90)h, (5.05±0.66)h, (13.54±6.37)h, (5.67±1.15)h and (3.60±1.23)h respectively; AUC0～t in various tissues was (118.68±5.64)(μg·h)/ml, (28.18±5.42)(μg·h)/g, (17.52±2.09)(μg·h)/ml, (36.77±10.47)(μg·h)/g, (16.12±0.59)(μg·h)/g and (16.57±0.47)(μg·h)/ml respectively. Conlusion Sparfloxacin has a good distribution and high concentration in various intraocular tissues of rabbit after oarl administration. It can replace parenteral sparfloxacin for ophthalmic diseases.
KEY WORDS Sparfloxacin; Rabbit; Distribution; Pharmacokinetics; HPLC
司帕沙星(sparfloxacin，SPLX)是一种对葡萄球菌和包括肺炎球菌在内的链球菌等革兰阳性菌有效的新型广谱氟喹诺酮类抗菌药，SPLX对革兰阴性菌如肠杆菌科、流感嗜血杆菌、假单胞菌及支原体、衣原体、军团菌、分枝杆菌等有效；对绝大多数革兰阳性球菌的体外抗菌活性强于环丙沙星、氧氟沙星和诺氟沙星，在动物感染模型中对革兰阳性菌和革兰阴性菌的体内抗菌活性强于环丙沙星［1，2］。已有文献报道SPLX人体和动物口服后的药动学、组织分布、胆汁和尿液排泄，但目前尚无其在眼内组织分布及相关药动学的报道。为探讨口服SPLX在眼内各组织中药物浓度是否可替代治疗眼病时肠外给药，笔者选用SPLX以12.4mg/kg给家兔灌服［3］，研究SPLX眼内各组织分布及其药动学，为临床眼科用药提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 药物与试剂
司帕沙星片(商品名：巴沙，成都倍特药业有限公司)，每片0.1g，批号050701，参照文献［3］配制成浓度为0.41%的SPLX羧甲基纤维素混悬液备用；司帕沙星标准品(重庆芸峰药业有限公司)，纯度99.1%，批号030612；内标为加替沙星(GTLX，河南康泰制药集团公司)，纯度：99.7%，批号990714。二氯甲烷、甲醇、三乙胺、磷酸、磷酸二氢钾均为分析纯。
1.2 仪器
高效液相色谱仪，包括LC10泵系统，SPD10A型可调波长紫外检测器和CR7 Aeplus积分仪(日本岛津公司)。ZS831内切式组织匀浆器，浙西机械厂生产。B160A型医用离心机，白洋离心机厂生产。
1.3 动物
健康合格一级新西兰家兔，雌雄兼用，体重2.0～3.0kg，由重庆医科大学动物中心提供，动物合格证号：SCXK(渝)20020001。环境设施许可证：SYXK(渝)2002007。
1.4 给药及采样方法
27只家兔随机分为9组，每组3只6眼。参照文献［4］，各组家兔均灌服SPLX 12.4mg/kg，分别于给药后0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0h时用滤纸(长5mm，宽2mm)置于结膜囊下吸取泪液，电子天平称重，滤纸前、后重量之差即为泪液重量。随即采用空气栓塞处死家兔，迅速摘取眼球，用生理盐水反复冲洗。抽取房水、玻璃体，然后刨开眼球，取出角膜、虹膜睫状体、晶状体，经滤纸吸干后称重，分别置于不同试管中剪碎，制备匀浆。
1.5 样本测定方法
1.5.1 色谱条件 色谱柱为Gemini C18(250mm×4.6mm，5μm)，固定进样环为50μl，流动相为0.01mol/L磷酸二氢钾∶三乙胺(磷酸调pH=3.0±0.1)∶甲醇(34.8∶0.2∶65)［5］，柱温为30℃，流速1.2ml/min，检测波长292nm。在上述条件下SPLX与内标GTLX及眼组织中杂峰分离良好(图1)。
1.5.2 样品处理 分别取各组织匀浆1.5ml置于10ml试管中，依次加入内标稀释液0.05ml(浓度为0.3μg/ml)、二氯甲烷4ml，振荡1min，离心3min(3000r/min)；取二氯甲烷层3.0ml，置于5ml离心管中，40℃水浴下氮气吹干。用100μl流动相复溶，取50μl流动相复溶液进样。
1.5.3 方法学考察
(1)标准曲线 用空白眼组织混合匀浆将SPLX标准品稀释成0.00781、0.01563、0.03125、0.06250、0.12500、0.25000、0.50000、1.00000、2.00000、4.00000μg/ml标准液，按样品处理方法处理并测定，以药物面积与内标面积之比对浓度进行线性回归，得回归方程：
Y=0.01001X-0.1135 r=0.99997
(2)精密度和回收率 按照标准曲线制作方法，采用低、中、高三个浓度评价本法测定空白眼组织混合匀浆中SPLX含量的日内、日间相对标准差(RSD)、回收率；如表1所示。最低定量浓度为0.00781μg/ml。
2 结果
2.1 SPLX家兔灌服后在眼各组织中的浓度
用SPLX灌服后，不同时间泪液、角膜、房水、虹膜睫状体、晶状体和玻璃体中SPLX浓度见表2。由表2可见，房水中的SPLX浓度在6.0h时达峰值，为(2.06±0.14)μg/ml；泪液、角膜、虹膜睫状体、晶状体和玻璃体中SPLX浓度也在4.0h达峰值，其中泪液SPLX浓度较其它组织高。 表2 家兔SPLX灌服后各眼组织内平均浓度
2.2 家兔SPLX灌服后各组织中药动学参数
家兔灌服SPLX后在泪液、角膜、房水、虹膜睫状体、晶状体、玻璃体的药时曲线如图2所示。SPLX在眼内各组织均有分布，泪腺因为有泪腺动脉直接供应加上粘膜通透性好，使其分泌物泪液中SPLX浓度比其它各眼组织浓度高数倍之多。
所测得的玻璃体SPLX浓度经3p97程序进行最佳拟合，其药时曲线符合二室模型，药动学参数见表3。表3中K12为血液玻璃体转运速率常数，K21为玻璃体血液转运速率常数，药物在玻璃体中呈二室模型分布，可能与玻璃体的成份及解剖特征有关。玻璃体主要由水和胶质组成，呈凝胶状，无相应血管供应。这些特平均药时曲线(n=6) 表3 家兔SPLX单剂量灌服后玻璃体中药动学参数性使SPLX进入玻璃体时较本文其它眼组织多了一个血液和玻璃体的相互转运的过程。
泪液、角膜、房水、虹膜睫状体、晶状体的药时曲线符合室模型，其药动学参数详见表4。
3 讨论
司帕沙星是20世纪90年代问世的新型氟喹诺酮类药物，由于其化学结构具有许多有效功能团，使其对革兰阳性菌和阴性菌及厌氧菌［包括对耐甲氧西林金葡菌(MRSA)］都有较强的活性的抗菌活性强。据文献报道［6］，SPLX对溶血链球菌、草绿色链球菌、肺炎链球菌、肺炎杆菌、普通变形菌、奇异变形菌的MIC90为0.5μg/ml，对金葡球菌甲氧西林敏感菌的MIC90≤0.06μg/ml，流感杆菌的MIC90＜0.03μg/ml，克雷伯菌的MIC90为0.25μg/ml，宋氏志贺菌、伤寒杆菌、沙门菌属的MIC90为0.03μg/ml；对人型支原体的MIC90为1.0μg/ml，解脲脲原体的MIC90为4.0μg/ml［7］。本表4 家兔SPLX单剂量灌服后眼内各组织药动学参数
实验结果表明，给药后1.0h泪液中药物浓度达(5.51±4.32)μg/ml，高于多数革兰阳性菌和阴性菌的MIC90值，至12.0时仍高于革兰阳性菌和阴性菌的MIC90值数十倍。在角膜和虹膜睫状体中药物浓度均较高，给药后4.0h达峰浓度分别为(3.25±0.32)和(3.41±0.26)μg/g，至给药后12.0h仍高达(0.96±0.093)和(1.55±0.13)μg/g，表明本品易于分布在眼组织中，并且保留时间长，浓度高于多数细菌MIC90，提示本品口服用药能满足眼科常见病的治疗，每天用药1次～2次，无须肠外给药。
本实验结果表明，SPLX在泪液、角膜、房水、虹膜睫状体、晶状体组织中t1/2(Ke)分别为(8.18±0.70)、(9.94±3.90)、(5.05±0.66)、(13.54±6.37)和(5.67±1.15)h；tmax分别为(3.45±0.39)、(2.58±0.56)、(3.39±0.17)、(3.04±0.78)和(3.76±0.073)h；cmax分别为(12.85±0.70)μg/ml、(2.15±0.14)μg/g、(1.50±0.088)μg/ml、(2.74±0.085)μg/g和(1.30±0.054)μg/g，说明SPLX在眼内各组织中浓度高，达峰时间较快，代谢慢。本品在泪液、角膜、房水、虹膜睫状体、晶状体、玻璃体组织中AUC0～t分别为(118.68±5.64)(μg·h)/ml、(28.18±5.42)(μg·h)/g、(17.52±2.09)(μg·h)/ml、(36.77±10.47)(μg·h)/g、(16.12±0.59)(μg·h)/g、(16.57±0.47)(μg·h)/ml。上述结果表明，SPLX易渗透到眼内各组织中，且具有较高浓度。
综上所述，SPLX易于分布到眼内各组织中，分布浓度高，在组织中保留时间较长，有益于眼科感染的治疗时口服给药，值得临床推广应用。
【参考文献】
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［5］ 张先洲，陈晓莉，韩世平. RPHPLC法测定加替沙星血药浓度［J］. 中国药师，2004，7(9)：715～ .
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