作者：丁正华，严宏，郭勇，哈文静，王建伟
0引言
白内障是世界上首位致盲眼病［1］. 随着生活水平不断提高和人口老化，糖尿病患者日渐增多,糖尿病性白内障患者也在增加. 20世纪80年代以来, 国内外开始使用链脲佐菌素（STZ）制备糖尿病动物模型, 此模型有白内障合并症，现已用于糖尿病性白内障发病机制和药物治疗的研究［2］. 我们观察了STZ 诱导的糖尿病性白内障模型的发生、发展过程，并探讨糖尿病性白内障可能的发生机制.
1材料和方法
1.1材料SD大鼠25只，体质量90~160 g，雄性，1 mo龄，由第四军医大学实验动物中心提供. STZ, 5羟基糠醛（5HMF）为美国Sigma公司产品，血糖试纸由罗氏诊断产品有限公司（瑞士）生产，紫外可见分光光度计（Sp756型），上海光谱公司. 过氧化氢酶（CAT）测定试剂盒、谷胱甘肽（GSH）测定试剂盒、谷胱甘肽还原酶（GR）测定试剂盒、考马斯亮兰蛋白测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所.
1.2方法
1.2.1糖尿病大鼠模型的制备从25只大鼠中随机抽取5只为正常组，其余大鼠用于建立糖尿病大鼠模型，并给予STZ 65 mg/kg，ip（用0.1 mol/L，pH为4.5柠檬酸盐缓冲液配置）诱发糖尿病， STZ注射后72 h测定大鼠血糖，血糖>14 mol/L者纳为糖尿病组大鼠. 正常组大鼠腹腔注射等量柠檬酸盐缓冲液. 每笼5只饲养，饮用自来水，自由摄食，饲以大鼠常规颗粒饲料（第四军医大学实验动物中心提供）.
1.2.2大鼠一般情况的观察每日观察大鼠饮水、饮食量、尿量情况. 每周称量大鼠体质量，每4 wk大鼠尾端取血，滴于血糖试纸上准确反应5 s，使用罗氏血糖仪（爱康全）比色并记录，监测血糖变化，血糖低于14 mol/L的大鼠予以剔除.
1.2.3大鼠晶状体混浊程度的观察复方托吡卡胺滴眼液点大鼠双眼1次，5 s后使大鼠吸入乙醚蒸气而麻醉. 使用BQ900裂隙灯观察大鼠，每周根据晶体混浊情况分级. 分级标准参考牛津大学眼科实验室晶状体分级方法［3］.
1.2.4大鼠晶状体生化指标的测定13 wk时脱臼法处死大鼠，摘除眼球，分离晶状体，称量晶状体湿重，以1∶19生理盐水在0℃冰水中研磨，按南京建成生物工程研究所试剂盒说明测定晶状体中蛋白、GSH含量及CAT, GR的活性. 糖基化蛋白测定：①晶状体匀浆沉淀，5倍重100 g/L三氯乙酸（TCA）中研磨，4℃放置整夜；②10 000 g离心20 min，移去上清液，用同体积100 g/L TCA冲洗沉淀，10 000 g离心20 min，移去上清液. ③将沉淀放置于1 mL二乙基乙醚内，室温下放置10 min. 11 500 g离心5 min，移去上清液，用二乙基乙醚冲洗沉淀两次（1 mL和0.5 mL）. 将沉淀放置蒸发皿上，将二乙基乙醚挥发完. ④将沉淀称重，放入带旋盖的密封试管内，加入1 mol/L的草酸1mL. 标准管由0.02 g 5HMF和1 mol/L草酸1 mL组成，空白管为1 mol/L草酸1 mL. ⑤保持100℃ 2 h，再冷却到室温. 将溶液加入离心管并加入400 g/L TCA，在冷水内冷却10 min使蛋白沉淀. ⑥3500 g离心15 min，从每管移出1.6 mL上清液到埃道夫管，进一步11 500 g离心5 min. ⑦取出上清液0.75 mL加入0.05 mol/L硫代巴比妥酸（TBA） 0.25 mL，用1 mol/L氢氧化钠调pH至6.0，在波长为443 nm处读数. 使用不同浓度的5HMF测量绘制曲线图，查图计算晶状体糖基化蛋白含量.
统计学处理： 全部数据经SPSS 11.0统计软件处理. 正常组大鼠与糖尿病组大鼠血糖、体质量及酶含量的分析，经方差齐性检验，方差齐，采用两样本t检验. 正常组大鼠与糖尿病组晶状体混浊程度比较采用Wilcoxon rank sum test分析.
2结果
2.1实验过程中大鼠血糖监测STZ注射后共有14只大鼠血糖大于14 mol/L，占总数的70％（14/20）. STZ注射后72 h，4 wk，8 wk，12 wk，13 wk时糖尿病组大鼠血糖明显高于正常组大鼠(P<0.05，表1). STZ注射后第8周，糖尿病组大鼠中有1只大鼠血糖降于14 mol/L以下，占总数7.1％（1/14），予以剔除.
表1血糖变化(略)
aP<0.05 vs正常.
2.2实验过程中大鼠一般情况的观察糖尿病组大鼠自STZ注射后1 wk饮水、饮水、尿量明显增加，约为正常组的3倍. 正常组的大鼠随着时间的增加体质量增长，糖尿病组大鼠体质量缓慢增长，并逐渐出现糖尿病并发症，出现消瘦和多发感染，第9，10，12 wk时糖尿病组大鼠分别有1只死亡. STZ注射前两组大鼠体质量无明显差异(P>0.05). STZ注射后2~13 wk糖尿病组大鼠体质量明显低于正常组(P<0.05，图1).
aP<0.05 vs正常组.
图1实验中两组大鼠体质量变化(略)
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