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2 结果
2.1 视网膜神经节细胞的鉴定结果 Nissel小体染色检查：免疫组化染色结果显示细胞胞浆内有蓝色颗粒，证实细胞类型为神经元细胞。因此，依据细胞的组织来源、细胞的形态以及免疫组化染色结果可判断此种细胞为视网膜神经节细胞。
2.2 视网膜神经节细胞的存活状况 相差显微镜下观察，细胞于培养3 h开始贴壁，贴壁后的细胞呈圆形，胞体中部较暗，光晕明显。24 h细胞伸出粗细长短不等的突起。细胞呈多边形，大多数细胞质折光强，细胞分布稀疏分散，无聚集生长的现象；高压的神经节细胞核膜收缩成新月体状，核体积减小，细胞体积缩小，表面起泡，成不规则形状。
2.3 DSX对高压培养视网膜神经节细胞凋亡的影响 见表1。模型组的细胞凋亡百分率高于空白对照组的细胞凋亡百分率，差异有非常显著性（P<0.01）。DSX组凋亡百分率低于模型组、高于空白对照组，差异均有非常显著性（P<0.01）。表1 DSX对高压培养视网膜神经节细胞凋亡的影响注：与空白对照组比较，★★P<0.01；与模型组比较，▲▲P<0.01
2.4 DSX对高压培养视网膜神经节细胞凋亡基因表达的影响 见表2。与空白组比较，模型组有2个与细胞凋亡相关的基因S100B、NGFR表达上调，与模型组比较，实验组的S100B表达恢复正常，NGFR表达下调。表2 DSX对高压培养视网膜神经节细胞凋亡基因的影响
3 讨论
S100B蛋白是一种钙传感器蛋白，在细胞增殖、分化、能量代谢、传导细胞内信号及细胞凋亡中发挥重要的作用［3，4］，编码S100B蛋白的基因位于人类染色体21q22.2～q22.3，含有3个外显子和2个内含子，其mRNA由1095bp组成，编码91个氨基酸的S100B蛋白。体外实验证明S100B蛋白多通过与钙结合发挥其生理作用［5］。高浓度的S100B蛋白有神经毒性，细胞培养研究表明，S100B蛋白参与NO介导、细胞因子依赖的神经元致死途径。S100B浓度过高则导致神经元凋亡［6］。
NGFR作为一种经典的神经营养因子在轴突的生长和细胞的存活方面起着非常重要的作用，并能促进损伤后神经元再生。神经系统损伤后，NGF效应神经元表达NGFR增加，而且靶区NGF的水平也明显升高。实验证明P75NTR可选择性地导致细胞程序性死亡，在神经系统中扮演凋亡使者的角色，而此作用能够由于其结合了NGF而被抑制［7］。NGF与P75NTR结合后能促使细胞内的NFκB的激活，可能对细胞凋亡起拮抗作用。
药理研究证明灯盏花具有舒张脑血管、抗脑缺血、改善微循环、降低全血黏度和血浆纤维蛋白原等作用［8］。目前已广泛用于脑梗死［9］、糖尿病周围神经病变［10］等方面。眼科用于包括视网膜静脉阻塞、缺血性视神经病变、视网膜动脉阻塞外伤性视神经病变在内的眼底病［11］等疾病。对大鼠实验性高眼压的也研究表明灯盏细辛注射液具有改善大鼠实验性高眼压后视神经轴浆运输的作用［12］。本实验利用体外高压培养的视网膜神经节细胞，探讨DSX的细胞保护作用，发现DSX的作用途径可能是抑制S100B蛋白的表达增加，具有类似神经营养因子的作用，使神经营养因子受体NGFR表达下调，从而起到抑制RGCs凋亡，保护RGCs的作用。
［参考文献］
1 张宗端，段俊国.优视胶囊对急性高眼压家兔眼压及神经节细胞的影响.眼视光学杂志，2001，3（2）：99-102.
2 王另芳，段俊国.优视胶囊对不同高眼压家兔模型视功能影响的实验研究.成都中医药大学2002届硕士研究生学位论文.
3 Michetti F，Gazzolo D.S100B protein in biological fluids:a tool perinatal medicine.Clin Chem，2002，48(12):2097-2104.
4 李手霞，邓群颖，赵瑞月，等.S100B蛋白检测对神经系统损伤早期诊断临床应用进展.中国误诊学杂志，2002，2（8）：1156-1158.
5 Donato R.Intracellular and extracellular roles of S100 protein.Microse Res Tech， 2003，60(6):540-551.
6 孙静，阚耀东.S100B蛋白的生物学特性及其在临床中的应用进展.诊断学理论与进展，2005，4（2）:172-174.
7 Shahrooz R，Justin Oh，Zhong LT，et al.Induction of apoptosis by the lowaffinity NGF receptor.Science，1993，261:345.
8 周曾同.灯盏细辛研究概况.临床口腔医学杂志，2001， 17(3):238-238.
9 赵建国，赵红，靳宁，等.灯盏花注射液对脑梗塞病人血流变学改变的临床观察.中国中医急症，1997，6（1）：3.
10 佟爱华.云南灯盏花素治疗糖尿病周围神经病变30例.时珍国医国药，1999，10（11）：863.
11 韦企平，张守康，接传红，等.灯盏花注射液为主治疗眼底病临床观察.中国中医眼科杂志，1999，2（9）：34-35.
12 朱益华，蒋幼芹，刘忠浩，等.灯盏细辛注射液对鼠实验性高眼压视神经轴浆运输的影响.中华眼科杂志，2000，36（4）：289-291. 上一页 [1] [2] |
