图1视网膜Phospo-ERK1/2免疫组化染色　略

　　22图像分析结果经LSDt检验，注射谷氨酸7 d组的灰度值（9700±221）与对照组的灰度值（12800±323）和注射谷氨酸3 d组的灰度值（12600±412）之间均有差异（7 d组与对照组P1=0024,7 d组与3 d组P2=0031）.对照组与注射谷氨酸3 d组间无差异（P=0083）.

　　3讨论

　　本研究发现，在正常状态时，仅在视网膜节细胞层有少量的pERK1/2的阳性表达，当玻璃体内注射谷氨酸3 d后，在视网膜节细胞层和内丛状层ERK1/2通路激活略有增加，而在注射谷氨酸7 d后，视网膜的pERK通路大量激活，根据阳性细胞胞核和放射状突起纵穿视网膜的的特征性结构和其位于内核层的位置特点可以确定激活的细胞主要为Müller细胞，其增殖的细胞胞体肥大，细胞突起浓密而均匀，部分伸出的突起达外丛状层、外界膜和内界膜，甚至纵穿视网膜全层.Müller细胞在视网膜内起支架作用，胞体位于内核层，伸出放射状粗细不同的突起纵穿视网膜，形成了视网膜的内、外界膜，对维持细胞外和玻璃体内的谷氨酸水平起着重要的作用［4,5］.通常谷氨酸被Müller细胞迅速从细胞间质运走，在细胞内再转化成谷氨酰胺，通过谷氨酸/谷氨酰胺循环又以谷氨酸形式释放于突触间隙发挥兴奋性神经递质的功能.在玻璃体内注射谷氨酸后，视网膜细胞外的谷氨酸超过正常生理浓度，对神经元产生了毒性作用，机体通过自我保护和修复机制，激活了大量的Müller细胞来清除过量的谷氨酸，同时由于谷氨酸的毒性刺激导致Müller细胞的ERK1/2的磷酸化水平上调.由此可见，Müller细胞对视网膜神经元受到谷氨酸毒性损伤后的保护作用有部分可能是通过ERK通路的激活来完成的.Roth等［6］发现视网膜缺血6 h后Müller细胞的ERK表达增加，使用其抑制剂PD98059后，内核层变薄，RGCs凋亡增加，表明ERK的激活对视网膜缺血有神经保护作用.Orike等［7］研究发现大脑受到伤害性刺激后，星形胶质细胞和神经元的ERK1/2通路的激活可以抑制神经元的凋亡，促进神经元的存活，阻断ERK通路后，神经元的凋亡率显著增加，可见在大脑ERK通路的激活也起到了神经保护作用；聂亚雄［8］等研究发现脑溢安含药血清能上调谷氨酸损伤后的大鼠海马神经元的ERK水平，其抑制剂能阻断脑溢安对神经元的保护作用；通过上述研究结论结合本实验结果，我们可以推测玻璃体内注射谷氨酸后，一方面，机体通过自身保护机制调节大量视网膜Müller细胞激活，清除过量的谷氨酸；另一方面谷氨酸毒性刺激使得Müller细胞上的ERK通路的激活,既可以直接抑制神经元的凋亡，又可以将细胞外生长、分化信号转导至细胞核，启动核内转录因子，从而促进Müller细胞进一步的增殖和分化，为神经节细胞提供更多重要的营养物质和有利的生存环境，抑制神经节细胞的凋亡.本实验通过对在体谷氨酸毒性损伤时视网膜ERK信号通路的研究，为青光眼视神经保护治疗提供了一个新思路.

　　【参考文献】

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