【摘要】 目的: 探讨倍他洛尔滴眼液对兔青光眼视网膜神经节细胞（RGC）的保护作用。 方法: 大耳白兔24只，随机分为对照组A和给药组B。两组内每只兔右眼作为对照组A1，B1组;左眼作高眼压灌注，各为A2，B2组。30d后各组分别进行RGC凋亡检测，比较各组的差异。 结果: A1与B1组没有找到染色阳性细胞。B2组比A2组染色阳性细胞少（P<0.05）。 结论: 高眼压能导致RGC发生凋亡，而倍他洛尔滴眼液能部分地阻止其凋亡的发生，倍他洛尔滴眼液对RGC没有毒性作用。
【关键词】 倍他洛尔;急性高眼压;视网膜神经节细胞;凋亡
在青光眼的发病机理中，谷氨酸对视网膜神经细胞的毒性作用已逐步被认识:高浓度的谷氨酸对视网膜神经节细胞（retinal ganglion cell，RGC）会产生损伤，诱导神经细胞的凋亡。高眼压和缺血会使眼内谷氨酸的浓度增加，并且和眼压呈正相关 ［1］ 。现今，拮抗谷氨酸毒性的药物正在成为神经保护治疗的热点。倍他洛尔被认为能够有效地拮抗谷氨酸的毒性，保护RGC ［2］ 。然而，倍他洛尔的实验研究主要集中在全身用药，局部点眼是否能够有效地保护RGC，在国内外研究甚少，而在临床应用倍他洛尔时，却主要是局部点眼。因此，我们用大耳白兔的高眼压模型，予倍他洛尔（贝特舒）滴眼液治疗后，通过观察RGC的凋亡数量及超微结构的改变，来了解倍他洛尔局部应用的临床效果。
1 材料和方法
1.1 实验动物及分组 成年健康大耳白兔24只，体重1.7～2.5kg，无眼疾。随机分成A、B两组，每组12只。A组为对照组，每只兔选左眼作高眼压灌注组A2，右眼为A1组;B组为给药组，每只兔选左眼作高眼压灌注组B2，右眼为B1组。
1.2 实验药品 贝特舒眼用混悬液（0.25%盐酸倍他洛尔）:爱尔康公司。
1.3 动物模型制备 动物麻醉后，选左眼用7号针头的输液器沿角膜缘作前房穿刺，升高生理盐水输液瓶至距动物垂直距离为136cm处，此高度可形成100mmHg眼压 ［3］ ，维持60min。B组灌注后立即予倍他洛尔滴眼液点双眼，用药方法为2滴/12h，连续30d;A组灌注前后不点眼。
1.4 凋亡细胞的检测 于第31d耳缘静脉注气法处死，分离出眼球壁，固定于10%中性福尔马林中，用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术检测RGC中的凋亡细胞，在显微镜下计数每个高倍镜视野下的凋亡细胞数。
1.5 统计学方法 数据采用SPSS11.5软件进行统计学分析，计算各组平均值和标准差，两组间比较采用t检验。
2 结果
在显微镜下，可见凋亡细胞染色阳性，细胞核呈棕黄色，主要分布在视网膜的内核层和RGC层（表1）。每个标本计数10个高倍镜视野下的阳性细胞，数据经统计学处理，进行方差分析（表2）。A2与A1比较，阳性细胞数增多（P<0.001），说明高眼压可以导致RGC凋亡;B2与A2比较，阳性细胞数减少（P<0.05），说明贝特舒滴眼液点眼有防止高眼压导致RGC凋亡发生的作用;B2与A1比较，阳性细胞数增多（P<0.001），说明贝特舒滴眼液局部点眼不能完全阻止RGC凋亡的发生;A1与B1比较，差异无显著性（P=1），说明贝特舒滴眼液无毒性作用，不能导致RGC凋亡。
表1 RGC的凋亡结果（略）
表2 二组间均数的比较（略）
3 讨论
倍他洛尔为选择性β-受体阻滞剂，通过抑制房水生成而降低眼压，也有扩张血管的作用，增加视网膜的血液供应，有保护视神经的作用。而且有实验证明，倍他洛尔局部使用可以到达视网膜 ［4］ 。Osborne ［5］ 等在兔、鸡视网膜细胞培养的离体试验和升高眼压造成的鼠视网膜缺血活体实验中发现倍他洛尔具有神经保护作用，表现在倍他洛尔能部分地防止由NMDA（N-甲基-D天冬氨酸）和缺氧引起的视网膜的改变;几乎完全阻止了由谷氨酸或缺氧/再氧化所致的乳酸脱氢酶的释放; 明显减少由谷氨酸兴奋剂引起的钙离子升高。倍他洛尔对谷氨酸的拮抗作用并不是由于它有对NMDA受体有拮抗作用，而是由于它能部分的阻止NMDA过度兴奋介导的Ca 2+ 内流，能部分的阻止引起凋亡的级联反应。
倍他洛尔减少由谷氨酸介导的钙离子的升高，既减轻了细胞渗透压改变导致的水肿，从而减少RGC坏死;又减轻钙离子对核酸内切酶，NO合成酶等的激活，抑制了RGC凋亡的发生。倍他洛尔在细胞坏死和凋亡两个方面都起到了抑制作用。有人等认为轻度的NMDA受体激活即谷氨酸的兴奋性将刺激神经元凋亡，而过强的激活则导致这些细胞的坏死，很可能青光眼引起的RGC的NM-DA受体激活是轻度的而非强烈的 ［2，6］ 。然而在人类青光眼中，急性青光眼大发作，能否引起细胞的死亡未见报道。
在临床上，治疗青光眼的主要方法是手术降低眼压，然而有许多患者虽然眼压降低了，但视野和视神经仍不断损害。我们认为倍他洛尔（贝特舒）滴眼液不仅可以在慢性开角型青光眼及正常眼压青光眼时使用，也可在青光眼大发作以及缓解和术后应用一段时间，来拮抗谷氨酸增高的毒性作用，保护视神经;且以滴眼的方式给药，患者容易接受，并且方便实施。
【参考文献】
［1］王宝平，蒋幼芹，黄佩刚，等.兔实验性急性高眼压模型视网膜谷氨酸的变化［J］.中华眼科杂志，2000，36（5）:378-380.
［2］ Dreyer EB.A proposed role for excitotoxicity in glaucoma ［J］.J Glaucoma，1998，7:62-67.
［3］归东梅，高殿文，徐洪斌，等.急性高眼压状态大鼠视网膜一氧化氮及其合酶变化的研究［J］.中华眼底病杂志，2001，17（3）:230-233.
［4］ Osborne NN，Chidlow G，Nash MS，et al.The potential of neuro-protection in glaucoma treatment ［J］.Curr Opin Ophthalmol，1999，10:82-92.
［5］ Osborne NN，Cazevieille C，Carvalho AL，et al.In vivo and in vit-ro experiments show that betaxolol is a retinal neuroprotective agent［J］.Brain Res，1997，751:113-123.
［6］ Quigley HA，Nichells RW，Kerrigan LA，et al.Retinal ganglion cell death in experimental glaucoma and after axotomy occurs by apop-tosis ［J］.Invest Ophthalmol&Vis Sci，1995，36:774-786. |
