2结果

    2.1葛根素对人RPE细胞的影响 不同浓度葛根素 (0.01，0.1，1g/L)分别作用于RPE细胞24h，与对照组相比,葛根素对RPE细胞增殖的抑制作用具有显著性差异(P＜0.01)，其抑制强度随药物剂量的增加而逐渐增强,分别为3.9%，20.6%，27.4%(表1)。贴壁生长良好的RPE细胞在给药后12h即可见部分细胞脱落，在24，36，48，72h，0.1g/L葛根素对RPE细胞增生的抑制效应随时间而明显增强，与24h及空白组比较，其抑制效应均有显著性差异(P＜0.01,表2)。

    2.2 葛根素抑制RPE细胞增生 葛根素作用于RPE细胞24h,MTT法检测有显著的抑制作用 ，且随药物浓度的增加而逐渐增强（表1）。另葛根素作用于RPE细胞后均使细胞3H-TdR掺入量减少(P ＜0.01)，其抑制效应随药物浓度的增加而逐渐增强(表1)。

    3讨论

    PVR是指在裂孔源性视网膜脱离或视网膜复位手术后，由于RPE细胞及神经胶质细胞的增生和收缩的病理过程，它可以造成视网膜裂孔、出血或牵拉性视网膜脱离而严重危害视力[1]。Kirchhof 等[2] 发现RPE细胞的迁移和增殖在PVR的病理改变中扮演着极其重要的作用。 在PVR时，血—视网膜屏障遭到破坏，RPE细胞暴露于血清中的各种生长因子和细胞因子中，活化而出现增殖。因此，RPE细胞在视网膜的增殖性疾病中具有重要作用，其异常增殖是许多增殖性视网膜疾病增殖膜形成的重要病理学基础。葛根素(puerarin,Pue)是从豆科植物葛的根中提取的一种异黄酮成分，具有扩血管、促进血液循环、改善微循环等主要作用。近几年药理研究表明，葛根素具有如下显著药理作用[3,4]：抑制TNF-α和IL-1β诱导的粘附分子表达[5]；抑制低密度脂蛋白氧化修饰的作用与其清除活性氧自由基有关，葛根素对活性氧如羟自由基和超氧阴离子有清除作用;通过调节一氧化氮合酶(NOS)活性使NO增高; 具有降血脂和抗氧化作用;对氧自由基有清除作用。我们通过细胞计数法、MTT比色法和3H-TdR掺入试验探讨葛根素对RPE细胞增殖及细胞内DNA合成的影响，结果发现葛根素对培养的RPE细胞增生具有抑制作用，且随药物浓度的增加和作用时间的延长，其抑制作用增强，存在时间和剂量依赖关系；另外，葛根素还抑制RPE细胞DNA合成，呈剂量依赖关系。在实验中我们发现贴壁生长良好的RPE细胞在给与葛根素干预后12h即可见部分细胞脱落，而贴附是贴附型细胞生长增殖的条件之一，通常细胞表面有由细胞分泌的糖蛋白膜，即细胞外衣，它对细胞运动尤其是贴附于支持物生长有重要作用。细胞外衣的性质与细胞物质交换、酸碱失衡及膜电位等有关，改变细胞外衣的性质可使细胞由支持物上脱落下来。研究表明RPE细胞中游离钙的浓度调节细胞吞噬功能状态、细胞增殖及细胞与基底膜的粘附力[6]，由此推测葛根素可能改变膜电位和细胞外衣的性质及细胞内钙浓度而引起细胞粘附力和增殖力下降。由于正常活细胞线粒体内琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物(formazan),且细胞存活数与其产生的MTT结晶物A值之间存在线性关系，MTT比色法发现,给药组细胞MTT结晶物产生量少于对照组，A值明显低于对照组,三种不同浓度的葛根素对RPE细胞增殖的抑制作用逐渐增强；同时，3H-TdR作为DNA合成的前体能掺入DNA合成代谢过程，通过测定细胞的放射性强度，可以反映细胞DNA的代谢及细胞增殖情况。3H-TdR掺入试验表明，与对照组比较，给药组RPE细胞3H-TdR掺入量显著减少，3种不同浓度的葛根素使RPE细胞的3H-TdR掺入量分别减少了2.6%，15.5%和22.4%，进一步证实了葛根素可干扰细胞代谢，抑制细胞内DNA合成，但本实验结果也表明,葛根素并不是完全通过抑制DNA合成来抑制RPE细胞增殖的，其确切机制还需进一步研究。

    【参考文献】

    1陈晓,洪玲,金中秋.玻璃体切除术治疗牵拉性视网膜脱离34例.国际眼科杂志,2005;5(5):964-966

    2 Kirchhof B, Kirchhof E, Ryan SJ, Sorqente N. vitreous modulation of migration and proliferation of retinal pigment epithelial cells in vitro.Invest Ophthalmol Vis Sci ,1989;30:1951-1957

    3崔岚,祝镇秋,陶达人.葛根素药理作用研究进展.中国药师,2004;7:924-927

    4李雯霖,姜德咏,郭丽花,王平,张莉.葛根素抑制糖基化终产物诱导的人视网膜色素上皮细胞增殖及低氧诱导因子-1α的表达.国际眼科杂志,2006;6(3):580-583

    5 Nagasaki H, Shinagawa K, Mochizuki M. Risk factors for proliferative vitreoretinopathy. Prog Retin Eye Res ,1998;17:77-98

    6 Kennedy BG, Mangini NJ.Plasma membrane calcium-ATPase in cultured human retinal pigment epithelium. Exp Eye Res ,1996;63:547-556

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