3   讨      论

    通过增加Rostock 角膜模块组件，HRTⅡ可转变成共焦激光角膜显微镜，用来获取和分析角膜各层面二维图像和整个角膜的三维图像。通过HRTⅡ/RCM，我们观察了角膜各层细胞形态并动态观察到角膜缘血管网内血细胞的流动及角膜缘Vogt栅栏状结构。即角膜缘上皮细胞层数增多向深层增生形成上皮柱，上皮柱之间的结缔组织向上突起形成指状突起，上皮柱和指状突起有规律地交替排列，在角膜缘表面呈现出放射状皱纹的特征性结构。角膜的表层上皮在组织学上为复层扁平上皮，在共焦显微镜下表现为大胞体，胞浆丰富，细胞核大而明显，细胞边界清楚，但形态不规则，形态越扁平，面积越大，则是最表层的上皮。当细胞面积达到一定程度，细胞膜破裂，上皮则出现脱落，为角膜上皮的不断更替过程，当有的区域已脱落，周边的细胞未及时覆盖，或下方的基底细胞末及时修补，则表现为图像上的黑区[2]。上方与下方角膜缘表层上皮细胞平均密度差异无统计学意义，二者均少于角膜中央表层上皮细胞。翼状细胞是界于表层上皮和基底上皮之间的过渡细胞，图像上仅偶尔发现，这可能与细胞数量较少或形态不典型有关。上皮基底细胞因细胞密度大，以及有很明显发亮的细胞边界，所以图像上很容易被识别。

    在角膜缘上皮下Langerhans细胞清晰可见，胞体明亮，细胞形态不规则，呈树枝状，上方和下方角膜缘Langerhans细胞平均密度两者比较差异无统计学意义，而在角膜中央区仅偶见Langerhans细胞。Langerhans cell是位于表皮和胃肠道上皮的未成熟树突状细胞（DC），其形态较扁平，表皮中活化的LC很少，LC经刺激而活化后，异体刺激能力增强；隐蔽的突起展开且数量和长度增加； LC具有较强吞噬能力和抗原提呈能力[3]。我们使用共焦显微镜活体观察到Langerhans细胞的形态，并对其细胞密度进行计数。这对于角膜及角膜缘疾病的基础研究有着重要的意义。

    角膜感觉神经丰富，神经末梢来自三叉神经第一主支眼支，经睫状神经到达角膜。大约有60~80支有髓神经于角膜厚度的中1/3处从角膜缘进入角膜，所以在角膜缘处的神经纤维显得粗些，以后逐渐变细，神经纤维继续前行，向浅表前行达Bowman膜，在其下形成致密的神经丛，这与共焦显微镜所观察到的相吻合：正常人角膜上皮基底细胞下层神经排列比较规则，平行走行，浅层神经纤维弯曲度较大，神经纤维分支较多，深层神经纤维粗大，弯曲度小，少见分支。角膜神经纤维丛的检查对探索许多眼病和神经病变有重要意义。王伟等[4]通过共焦显微镜可以观察到糖尿病引起的角膜神经营养性上皮病变，2型糖尿病患者角膜上皮下神经丛神经分支密度减少。张梅等[5]通过共焦显微镜发现水液缺乏性干眼患者角膜上皮基底层下神经存在异常改变。

    本研究同时发现前基质比后基质细胞密度明显增高，这种分布形式可能是人高度进化的结果，与人角膜抵抗各种致病因素造成损伤有关[6]。另外内皮细胞共焦显微镜检查的表现无论是在形态上还是在数量上和角膜内皮镜的检查结果基本一致。

    综上所述，HRTⅡ代/RCM激光共焦显微镜与传统的光学显微镜和电镜检查相比，不但具有高放大倍数及高分辨率等优点，且能在实时、活体条件下对角膜组织（包括角膜缘）进行无损伤的光学断层扫描成像，无需组织切片、固定和染色就能观察到角膜各层细胞、神经及胶原等形态结构，并可研究其动态变化，同时因减少了标本处理过程所造成的假象，真正体现了自然状态下的角膜病变。HRTⅡ代/RCM激光共焦显微镜因其分辨率高，即使在角膜水肿或混浊情况下仍可对角膜深部组织进行检查，这是角膜内皮镜检查所不能达到的。HRTⅡ代/RCM激光共焦显微镜的无创，实时，活体等优点[7]，使其具有广阔的基础研究和临床应用前景。

    【参考文献】

     [1] Zhivov A，Stave J，Vollmar B，et al． In vivo confocal microscopic evaluation of Langerhans cell density and distribution in the normal human corneal epithelium[J]． Graefe's Arch Clin Exp Ophthalmol，2005,243(10): 1056-1061.

    [2] 谢立信，史伟云，郭 萍．正常人活体角膜组织结构的共焦显微镜观察[J]． 中华眼科杂志，2000，36(3)：235-237.

    [3] 龚非力. 医学免疫学[M]. 第2版．北京：科学出版社，2004：169-170.

    [4] 王 伟,李筱荣,袁佳琴． Ⅱ型糖尿病患者角膜细胞形态学特征的共焦显微镜观察[J]．中国实用眼科杂志，2006，24(5)：508-512.

    [5] 张 梅,刘祖国,罗丽辉． Sjogren综合征和非Sjogren水液缺乏性干眼患者角膜上皮基底层下神经的异常改变[J]． 中华眼科杂志,2005,41(10)：936-939.

    [6] 罗丽辉,刘祖国,陈家祺． 正常角膜基质细胞密度和角膜厚度的研究[J]． 眼科研究，2004，22(5)：512-515.

    [7] 荣 蓓,晏晓明． 激光共焦显微镜对正常人眼角膜缘和中央角膜的观察[J]． 中华眼科杂志,2006，42(1)：17-21.

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