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2．2 一阶导数光谱 取上述a、b、c溶液，在200 nm～400 nm波长范围内进行扫描，完毕后直接进行数学变换，分别得到3种试液的一阶导数光谱。扫描条件同“2．1”，微分波长差为8；缩放系数为1，见图2。
图2 3种试液的阶导数光谱注：a：复方氯霉素滴眼液；b：氯霉素对照液；c：复方氯霉素滴眼液阴性对照液。由图2可见复方氯霉素滴眼液阴性对照液(缺氯霉素)在290．0 nm～400．0 nm波长之间的振幅值与零线基本重合，而复方氯霉素滴眼液(a液)在二阶导数图谱，296．3 nm波长处有最大振幅值，与氯霉素对照液为(b液)相一致因此，可选择296．3 nm为测定波长，利用复方氯霉素滴眼液在296．3 nm处的振幅值D对氯霉素进行含量测定。
2．3 标准曲线绘制 精密称取于105 ℃干燥至恒重的氯霉素对照品10．30 mg于100 ml量瓶中，加入无水乙醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得氯霉素标准储备液。分别精密吸取该储备液0．5 ml、1．0 ml、1．5 ml、2．0 ml、2．5 ml，分别置于10 ml量瓶中，加入无水乙醇定容，制成浓度(C)为5．15 μg/ml～25．75 μg/ml的系列工作液，以无水乙醇为空白，分别在296．3 nm波长处测定其一阶导数光谱的振幅值D，以浓度C对D进行线性回归，得回归方程：D=11．204×10-4C-0．5×10-4，r=0．999 8。表明氯霉素在5．15 μg/ml～25．75 μg/ml浓度范围内，其一阶导数振幅值D与浓度C呈良好线性关系。
2.4 回收率试验 精密吸取按“2．8样品含量测定”项下稀释的复方氯霉素滴眼液阴性对照液(缺氯霉素)2 ml，分别精密加入浓度为25．75 μg/ml氯霉素对照液4 ml、8 ml、12 ml、16 ml、20 ml，混匀，同标准曲线项下测定D值，以D值代入回归方程计算含量，结果见表1。
2．5 精密度试验 取氯霉素对照品液(20．60 μg/ml)5份，在波长296．3 nm处测氯霉素一阶导数光谱的谷—零振幅D值，RSD为0．24％。
2．6 稳定性试验 取“样品含量测定项下”的溶液(060401)分别于配制后室温放置0 h、2 h、4 h、6 h、12 h、24 h后测定谷—零振幅D值，RSD为0．23％。
2．7 重复性试验 取同一批号(060311)样品5份，按“样品含量测定项下”测定谷—零振幅D值，计算含量，含量分别为5．10 mg/ml、5．10 mg/ml、5．08 mg/ml、5．12 mg/ml、5．10 mg/ml，RSD为0．28％。
2．8 样品含量测定 精密量取复方氯霉素滴眼液2．0 ml置于100 ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，再精密量取稀释液2．0 ml置于10 ml量瓶中，加无水乙醇定容，摇匀。在296．3 nm波长处测定其二阶导数光谱的谷—零振幅值D，以D值代入回归方程计算含量，结果如表2。
表1 回收率试验结果 略
表2 样品含量测定样品 略
3 讨论
导数光谱(Derivative spectra)是紫外光谱的延伸，由紫外光谱经一定的数学处理后得到，其定量测定的基本原理系根据朗伯比尔定律，对其取n阶导数，其结果均与浓度成正比，由光谱法获得的导数光谱表现为其波峰或波谷与波长垂直距离及浓度成正比。目前，新型的紫外分光光度计均可通过电子学获得模拟导数光谱图，使其应用更加简化、普遍化［2］。氯霉素是复方氯霉素滴眼液方中的主药，测定氯霉素的含量可以有效地控制本制剂的质量，利用一阶导数紫外光谱法可以有效地消除背景吸收的干扰，测定制剂中氯霉素的含量。平均回收率为100．02％，RSD=0．10％(n=5)，24 h稳定性试验证明测定结果不受时间影响，说明该分析方法准确、灵敏、重现性好，且操作简便、快速、实用，易于普及，为含有氯霉素的复方制剂中氯霉素的分析测定提供了一个可借鉴的方法。
【参考文献】
［1］ 李发美.分析化学［M］．第5版．北京：人民卫生出版社，2003：213216.
［2］ 王文冈，恽榴红，王睿，等．二阶导数紫外分光光度法测定酒石酸美托洛尔体外经皮渗透量［J］．中国药房，2002，16(18)：13791381 上一页 [1] [2] |
