金玮   邢怡桥   杨安怀   杨燕宁   艾明

武汉大学人民医院眼科   430061

目的：观察全反式视黄酸（All-trans retinoic acid，ATRA）在诱导人脐带间充质干细胞（hUC-MSC）向感光细胞分化中对细胞形态、增殖、凋亡的影响并筛选其最适浓度，探讨与牛磺酸共培养后细胞的生物学特性。

方法：取生长良好的第3代hUC-MSC接种于24孔细胞培养板，细胞贴壁后更换为含ATRA的DMEM/F-12培养液。ATRA终浓度分别为0μmol/L-4.0μmol/L，诱导后1h、24h倒置显微镜下观察细胞形态、MTT法监测ATRA毒性、Annexin-V/PI联合流式细胞仪检测细胞凋亡百分率，确定ATRA最适诱导浓度。另取上述细胞接种于培养瓶，用含最适浓度ATRA和牛磺酸的培养基进行体外诱导28d，WesternBlotting测定诱导后细胞内Rhodopsin、CrX、recoverin、opsin蛋白表达水平。

结果：ATRA（<0.5μmol/L）对细胞增殖、细胞凋亡均无明显影响（P>0.05）；≥1.0μmol/L 能极显著抑制细胞增殖（P<0.01），且随浓度增加抑制作用越明显。Annexin-V/PI联合FCM检测显示≥1.0μmol/L组细胞凋亡百分率与对照组间具有极显著性差异（P<0.01）。0.5μmol/LATRA+牛磺酸诱导后，细胞内各蛋白表达水平增高，且显著高于单用牛磺酸诱导的细胞蛋白表达水平（P<0.01）。

结论：ATRA既参与细胞凋亡，也可促进hUC-MSC向感光细胞分化。0.5μmol/LATRA联合牛磺酸能诱导hUC-MSC向感光细胞分化，并表达特异性标志蛋白。为细胞移植治疗视网膜退行性病变提供了研究基础。