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2 结 果
2.1 Tenon′s囊成纤维细胞体外培养结果 倒置显微镜下观察，组织块接种6?d或7?d即可见细胞从组织块边缘游离出来，呈瘦小的梭形；培养10?d细胞即可融合生长，呈漩涡状外观。光镜下观察，细胞呈典型的梭形和不规则三角形，胞体狭长，胞浆丰富，边界清晰。HE染色后，光镜下可见细胞胞浆丰富、呈淡红色，核大、色浅蓝、位于细胞中央、核仁不明显，见图1，图2，图3。
2.2 对Tenon′s囊成纤维细胞增殖的抑制作用 MTT检测法结果表明，雷帕霉素浓度在10?ng/ml时，对成纤维细胞即具有抑制作用(P＜0.05)，且随药物浓度的增加，抑制作用增强。在20?ng/ml 160?ng/ml浓度范围内，对成纤维细胞具有明显抑制作用(P＜0.01)，其最大抑制率在160?ng/ml时可达43.57%，但在40 160?ng/ml之间，虽然随雷帕霉素浓度增加，抑制率未见进一步增强，见表1。
2.3 细胞周期的变化 40?ng/ml雷帕霉素作用后，G0G1期细胞由41.76%增加至44.19%，细胞滞留于G1期细胞，进入S期细胞由45.42%减少至40.18%，见图4，表2。表2 流式细胞技术检测各周期细胞百分率
3 讨 论
青光眼滤过术后纤维增生是一类较为难治的眼部疾病，预后较差，其主要原因是成纤维细胞的增殖和胶原的产生。
近年研究表明，雷帕霉素具有预防肾移植后免疫排斥、治疗胰癌等恶性肿瘤、防止动脉成形术后血管再狭窄的效果［46］，但用于抑制角膜移植术后免疫排斥反应、治疗单纯疱疹病毒性角膜炎等与免疫有关眼病的研究刚刚起步［7，8］。雷帕霉素是由31元环组成的一种三烯大环内酯类化合物，它通过抑制p70s6k激酶和cdk2循环素E的活化及4EBP1的磷酸化，阻断共刺激途径信号传递，抑制众多的细胞因子基因转录［9］，最终影响细胞DNA和蛋白质的合成，抑制细胞G1后期向S期过渡。本实验结果表明，雷帕霉素可抑制体外培养的人眼Tenon′s囊成纤维细胞由G1期进入S期，阻碍了DNA合成的起始，故推测雷帕霉素可能通过抑制细胞周期从而使细胞的增殖受到抑制。
MTT检测法是检测细胞增殖活力的一种简便、准确的方法，主要反映细胞的能量代谢。其原理是：增殖的活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶可将淡黄色的MTT还原成蓝紫色的甲瓒结晶沉积在细胞内和细胞周围，二甲基亚砜溶解结晶而显色，再通过酶标仪颜色深浅测定吸光度值，从而反映出细胞增殖情况（吸光度值越小，抑制作用越明显）。本研究采用MTT法观察雷帕霉素对人眼Tenon′s囊成纤维细胞生长的抑制作用，结果表明，雷帕霉素在10 160?ng/ml范围内随药物浓度的增加，吸光度值减小，但在40 160?ng/ml浓度范围内随药物浓度的增加，吸光度值未见明显变化。说明雷帕霉素对成纤维细胞具有增殖抑制作用，且此抑制作用为非剂量依从性。
本研究结果虽为雷帕霉素用于抗纤维增殖提供了实验依据，但其作用机制尚需进一步探讨。
【参考文献】
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［5］ Shah SA, Potter MW, Ricciardi R, et al. FRAPp70s6K signaling is required for pancreatic cancer cell proliferation［J］. Surg Res, 2001, 97(2):123130.
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