黄艳明
第三军医大学西南眼科医院 400038
目的：探讨较好的视网膜切片制作方法，以在切片上对双极细胞进行高效率、稳定的膜片钳记录。
方法：麻醉后剥离P21d Long Evan’s大鼠视网膜，采用滤纸贴附手工切片（A组，8次）和低熔点琼脂包埋震动切片机切片（B组，8次），切片后置于相同配方的氧饱和的胞外液中备用，取一片放入浴槽中对双极细胞进行膜片钳记录。比较两种方法制作的视网膜切片组织结构、细胞活性，双极细胞的封接成功率及记录的稳定性；并进一步探讨适当的琼脂浓度及在胞外液中长时间保持细胞活性的方法。
结果：A组中3次制作的视网膜切片切面平整度可、组织层次较清楚，细胞黑亮、边界清楚、活性好，对双极细胞的封接成功率高达64.2%，稳定记录时间为30±2.5分钟；5次制作的视网膜切片切面极不平整、层次不清，细胞活性尚可，对双极细胞的封接成功率为32.4%，稳定记录时间18±6.4分钟。B组中8次制作的视网膜切片切面均非常平整，视网膜十层结构清晰，其中2次由于切片制作过程中缺氧时间>20分钟。双极细胞重度水肿，封接成功率为18.6%，封接后给予瞬时负压时细胞均出现脱落和溶解，难以形成稳定的全细胞模式。
结论：浓度为3.5%的琼脂包埋制作的切片视网膜组织结构非常清晰，若能将组织缺氧时间控制在10分钟以内，并辅以低温预冷胞外液同样能保持良好的细胞活性，可达到较高的双极细胞封接成功率。
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