韩晓丽   黄礼彬

福建医科大学附属第一医院眼科   350000

目的：通过研究茄病镰刀菌刺激小鼠角膜基质细胞后Toll样受体4(Toll like receptor 4，TLR4)的表达分布状况，及其与炎性因子分泌的关系，探讨TLR4在真菌性角膜炎中的作用。

方法：1.应用消化法对小鼠角膜基质细胞进行原代培养；分别采用波形蛋白单克隆抗体、角蛋白12多克隆抗体进行免疫荧光细胞化学染色鉴定。2.制备茄病镰刀菌液；MTT法观察茄病镰刀菌液刺激对角膜基质细胞生长作用的影响。3.免疫组化、RT-PCR测定刺激后不同时间点角膜基质细胞TLR4的表达。4.ELISA检测封闭TLR4对茄病镰刀菌液诱导的角膜基质细胞分泌IL-8、TNF-α的影响。

结果：1.采用消化法1~2d培养出小鼠角膜基质细胞；抗波形蛋白免疫荧光染色阳性证实所培养的细胞为角膜基质细胞。2.在茄病镰刀菌液刺激角膜基质细胞48h后，MTT法显示刺激组较对照组A值明显的下降。3.正常角膜基质细胞TLR4在蛋白及mRNA水平呈弱表达，茄病镰刀菌液刺激3h可明显增加其表达，6h达到高峰，12h开始逐渐降低。4.茄病镰刀菌液可上调角膜基质细胞IL-8、TNF-α的释放，刺激3h、6h、12h的TNF-α、IL-8的浓度与TLR4 mRNA的表达呈明显的正相关(P<0.05)；预先用TLR4中和抗体封闭TLR4，可明显降低IL-8、TNF-α的释放。各时间组间的差异有统计学意义(P<0.05)。

结论：TLR4可能在角膜识别真菌感染、介导炎性防御反应过程中起到重要的作用。