周跃平   刘秋平   刘真   孙峰   刘晓琛   刘祖国

厦门大学医学院   厦门大学眼科研究所   361005

目的：探讨在化学刺激作用下离体角膜上皮细胞或活体角膜组织中Wnt信号转导通路是否参与，为角膜损伤的发生机理和治疗提供参考依据。

方法：1）离体角膜上皮细胞实验：在人类角膜上皮细胞系（HCE）和小鼠角膜干细胞系（TKE-2）中加入苯扎氯铵（一种滴眼剂中防腐剂成分）或其它条件培养基作用15分钟后，PBS清洗，4或8小时后进行细胞形态观察、流式细胞分析或Western Blot检测。2）活体大鼠角膜组织实验：滴注苯扎氯铵（0.005%，10 ul/hr）4或8小时后，通过Western Blot法检测大鼠角膜组织中pi-beta-catenin表达的变化。

结果：1）离体角膜上皮细胞实验：苯扎氯铵在不同浓度、不同作用时间可引起细胞数减少，流式细胞检测出凋亡细胞的特征分布。Western Blot结果显示Wnt通路下游重要因子pi-beta-catenin表达下调。Wnt通路抑制剂sFRP1可拮抗苯扎氯铵的作用。2）活体大鼠角膜组织实验：苯扎氯铵作用4小时后，引起pi-beta-catenin表达下调；作用8小时后，引起pi-beta-catenin表达明显抑制。

结论：本研究工作首次发现在苯扎氯铵刺激作用下离体人类角膜上皮细胞系和小鼠角膜干细胞系Wnt信号转导通路被激活、并且Wnt通路抑制剂对此有拮抗作用。在活体大鼠角膜组织也观察到在苯扎氯铵刺激作用下，Wnt信号转导通路被激活现象。