杨学义   宋晓平   姜发纲

洛阳师范学院生命科学系   西北农林科技大学动物医学院   华中科技大学同济医学院

附属协和医院眼科   471022

目的：探索表皮干细胞分化为角膜上皮细胞的可能机理。

方法：1.体外诱导分化：用transwell培养体系，在上层接种表皮干细胞，下层接种培养山羊角膜缘组织块，前3天用含10%新生牛血清的M199培养基，然后换成无血清培养基，共培养14天。2.体内诱导分化：以去细胞人羊膜为载体负载表皮干细胞构建组织工程角膜上皮，移植到角膜缘干细胞缺损模型山羊眼表，观察眼表微环境对表皮干细胞的诱导作用。3.检测：诱导和移植前后的表皮干细胞、人工角膜和重建角膜进行免疫荧光染色（激光共聚焦显微镜观察照相）和RT-PCR检测，比较表皮干细胞在不同实验条件下P63，CK14，CK1，CK12，PAX-6等基因的表达特征。

结果：未经诱导的表皮干细胞表达P63，CK14，不表达PAX-6，CK12；经诱导后表皮干细胞分化为角膜上皮样细胞表达PAX-6，CK12，而对照组只表达CK1，具有角化细胞特征；未经诱导的表皮干细胞移植后6个月仍弱表达CK1，而且是在基底部，这一表达特征与皮肤不同。但12个月后，只表达PAX-6，CK12，具有正常角膜上皮的分子标志特征。

结论：表皮干细胞在提内外诱导条件下均可以分化为角膜上皮，可以用于修复角膜缘干细胞缺损眼表。其机理可能与PAX-6上调和 CK1下调有关。