【摘要】 目的：观察脉络膜新生血管(CNV)动物模型视网膜色素上皮至脉络膜之间细胞因子VEGF、bFGF、PEDF表达的变化。方法：用半导体激光光凝建立CNV动物模型，于造模后1 w，2 w，3 w，4 w，8 w分别行免疫荧光检查(FFA);于造模后8 w处死动物行HE染色观察视网膜和脉络膜的病理组织学变化，免疫组化法检测VEGF、bFGF、PEDF表达。结果：HE染色可见脉络膜新生血管形成。造模后模型组VEGF、bFGF上调，VEGF/PEDF值升高，与正常对照组比较，差异有统计学意义(P<0.01);PEDF值轻度上调，与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论：半导体激光可诱导CNV动物模型，该模型可做为视瞻昏渺的动物模型进行实验研究。
【关键词】 视瞻昏渺;脉络膜新生血管;新生血管内皮细胞生长因子;碱性成纤维细胞生长因子;色素上皮衍生因子
年龄相关性黄斑变性(AMD)属于祖国医学“视瞻昏渺”范畴，本病随年龄增长，其发病率亦逐年升高。导致患者视力丧失的主要原因是继发于渗出型年龄相关性黄斑变性(ESMD)的脉络膜新生血管(CNV)。本病发病机理尚不明确, 治疗十分困难。研究显示，CNV的发生、发展和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)、色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor，PEDF)等密切相关。因此,我们从基础实验研究着手，建立相关动物模型,对VEGF、bFGF、PEDF进行研究,以期探索本病的发病机理，为寻求有效的治疗方案奠定实验基础。
1 材料与方法
1.1 实验材料
成年青紫蓝兔12只(约6月~7月龄)，普通级，体重(2 500±20)g。
1.2 实验方法
1.2.1 造模方法 12只青紫蓝兔随机分为正常对照组和模型组两组，每组6只。模型组以0.5%美多丽P滴眼液双眼散瞳，0.4%倍诺喜行眼表麻醉后,在全视网膜镜下用半导体激光(波长532 nm)于视乳头下方作视网膜光凝。照射部位位于视乳头及髓线下方，以光凝后有气泡产生为击破Bruch膜的标志 [1]。激光参数：功率625 mW~750 mW，时间0.1 s，光斑直径50 μm，点数40点。
1.2.2 观察指标与检查方法 于造模后1 w，2 w，3 w，4 w，8 w行FFA检查。造模后8 w处死动物，取动物眼球置于10%中性福尔马林液中，将固定好的眼球去除多余组织，留取激光斑部位眼球壁组织，正常对照组留取相应部位组织，常规石蜡包埋、切片，行HE染色。VEGF、bFGF、PEDF免疫组化染色用SP法，光学显微镜下观察视网膜和脉络膜组织学变化。造模8 w后采用Mias-2000型图象分析系统测定VEGF、bFGF及PEDF阳性表达。
1.3 统计学方法
采用SPSS12.0统计软件，组间比较采用t检验。
2 结 果
2.1 HE、VEGF、bFGF与PEDF染色结果
结果见图1。 由图1可以看出，HE染色正常对照组可见视网膜、脉络膜的各层结构整齐，细胞结构正常。视网膜各层细胞着染正常，未见坏死、出血等结构改变。视网膜神经纤维层排列完整，细胞排列致密，内核层无碎裂及细胞核减少，椎杆体细胞排列整齐，色素上皮细胞排列紧密;脉络膜结构完整，各层细胞着染正常。模型组可见视网膜神经节细胞不同程度减少，内颗粒层和外颗粒层结构不清，激光斑处色素上皮层基本消失，视网膜、脉络膜黏附在一起，激光斑下可见成纤维细胞，其中可见CNV，其血管管径较小，血管壁内皮细胞核肿胀，较圆。正常对照组视网膜色素上皮至脉络膜之间VEGF、bFGF、PEDF阳性表达较少，呈颗粒状;模型组阳性表达较多，呈密集的颗粒状及条带状，激光斑两侧视网膜脉络膜VEGF、bFGF、PEDF阳性表达较集中。视网膜色素上皮至脉络膜之间有棕黄色的颗粒，为bFGF阳性表达。正常对照组bFGF阳性表达较少，呈颗粒状;模型组阳性表达较多，呈密集的颗粒状及条带状，激光斑两侧视网膜脉络膜bFGF、bFGF、PEDF阳性表达较集中。
2.2 VEGF 、bFGF及PEDF 阳性表达与VEGF/PEDF结果比较
结果见表1。由表1可见，造模后8 w与正常对照组比较，模型组VEGF、bFGF上调(P<0.01)，PEDF值轻度上调，VEGF/PEDF值升高(P<0.01)。
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