刘学东　龚书明　郭守一　杨瑞华　邓中荣　陈景元

　　摘　要　目的： 观察厘米波对体外培养的猪视网膜神经细胞的脂质过氧化损伤作用及亚硒酸钠的防护作用.方法： 体外培养猪视网膜神经细胞，按微波强度分为3组进行微波辐照1 h，选60 mW/cm²组进行防护实验，在培养液中加入不同浓度的亚硒酸钠后辐照，照后即刻测培养液温度、细胞内GSH-Px, sOD活性、MDA含量和细胞内Se浓度.结果： 辐照后GSH-Px和SOD活性下降，MDA含量升高，变化程度随微波辐照强度增大而增大.加亚硒酸钠后辐照，可减轻这种损伤.结论： 本实验条件下，厘米波可引起体外培养的猪视网膜神经细胞的脂质过氧化损伤，亚硒酸钠可提高细胞的抗氧化能力，减轻微波辐照损伤.

　　关键词：微波　硒　视网膜

　　0　引言

　　近年来，随着微波的广泛应用，对眼睛的生物学效应已受到人们的普遍关注，与微波辐射有关的报道大多是白内障，对眼底损伤的报道较少.我们观察了厘米波对体外培养的猪视网膜神经细胞的脂质过氧化损伤作用及硒的防护效应，为进一步研究微波对眼底的损伤与防护提供了一定的依据.

　　1　材料和方法

　　1.1　材料　猪眼球取自某屠宰场，宰杀后立即摘取眼球，剪除周围多余的组织，清水充分洗涤，200 u的庆大霉素浸泡20 min，移入超净台，用Takahashi法^［1］培养视网膜神经细胞.自角膜缘后2 mm～3 mm处环形切开眼球，去除眼前部组织和玻璃体，轻轻剥离视网膜，用D-Hanks液漂洗2次，于解剖显微镜下取视网膜中无血管的部分，剪成糊状，加入含牛血清白蛋白(0.2 g/L), DL-半胱氨酸(0.2 g/L), 木瓜蛋白酶(26 U/mL)的Hanks液中，于37℃消化40 min，用吸管轻轻吹打，移入含100 mL/L小牛血清的DMEM培养液中，置于37℃,50 mL/L CO₂的孵箱中.

　　1.2　方法　辐射源为上海微波医疗仪器厂生产的微波理疗机，频率2450 MHz，连续波，微波屏蔽室内辐照. 气温23℃～25℃，相对湿度30%～40%.按微波强度分为对照组、10 mW/cm²组、30 mW/cm²组、60 mW/cm²组，辐照时间为1 h. 选取60 mW/cm²组进行防护实验，在培养液中加入不同浓度的Na₂SeO₃，分为10μmol/L组、1 μmol/L组、0.1 μmol/L组，培养瓶中均加入等量培养液.测定　①培养液温度：用7151型半导体温度计测定; ②细胞内GSH-Px, sOD活性和MDA含量的测定: 收集细胞，PBS漂洗2次～3次，用生理盐水调整细胞密度分别为1×10⁹/L和1×10¹²/L的细胞悬液，低温超声粉碎细胞，超速离心后取上清，羟胺法测SOD活性^［2］（与空白对照相比，抑制50%吸光度（A）为1个酶活性单位），改良硫代巴比妥酸荧光法测MDA含量^［3］,DTNB法测GSH-Px活性^［4］;③细胞内Se浓度测定： 将细胞收集、漂洗，调细胞密度为1×10⁹/L，低温超声粉碎细胞后于冷原子荧光质谱仪进行测定.所有数据均以平均数±标准差(X±s)表示，用t检验进行统计学处理，采用SPSS(6.0)统计软件包进行.

　　2　结果

　　2.1　细胞形态及培养液温度　细胞接种2 d～3 d后，部分细胞贴壁，细胞明亮，体积较小，呈圆形，分散存在，轴突明显.经微波辐照后，10 mW/cm²组细胞部分聚集成团，边缘较模糊，30 mW/cm²组、60 mW/cm²组成团细胞较多，部分细胞脱壁，细胞碎片增多.对照组培养液温度为(23.8±0.4)℃，10 mW/cm²组为(24.1±0.3)℃，30 mW/cm²组为(29.3±0.4)℃，60 mW/cm²组为(33.6±0.3)℃，除10 mW/cm²组与对照组间无显著性差异外，其余各组间均有显著性差异.加Se各组分别为(33.3±0.2)℃，(33.4±0.4)℃，(33.2±0.4)℃，与60 mW/cm²组相比，各组间均无显著性差异.

　　2.2　GSH-Px, SOD活性与MDA含量　10 mW/cm²微波辐照后，即可引起细胞内SOD与GSH-Px活性明显降低(P＜0.05, tab 1)，MDA含量显著升高(P＜0.01)，随着微波强度的增大，SOD与GSH-Px活性下降程度越大，MDA含量升高越明显.脂质过氧化损伤程度随微波强度增大而增加.

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