中华眼科杂志 1999年第5期第35卷 论 著
作者：顾扬顺 王 竞
单位：310003，杭州，浙江大学附属鳘医院眼科中心
关键词：角膜；人类白细胞抗原；DR分子；细胞间粘附分子-1；免疫组织化学
【摘要】 目的 探讨正常及病变角膜中人类白细胞抗原DR分子和细胞间粘附分子-1的表达及其在角膜炎症和移植排斥反应中的作用和影响。方法 应用免疫组化技术对10例正常人及48例患者的病变角膜标本进行人类白细胞抗原DR分子和细胞间粘附分子-1的表达的检测。结果 正常人角膜无或轻微表达人类白细胞抗原DR分子和细胞间粘附分子-1；病变角膜，尤其是炎症角膜及角膜移植术后发生排斥反应的角膜，其阳性表达率明显增高。结论 人类白细胞抗原DR分子和细胞间粘附分子-1的异常表达与角膜炎性反应有关，并可促进移植排斥反应的发生。
Expression and significance of human leukocyte antigen DR and intercellular adhesion molecule-1 in normal and pathological corneas
GU Yangshun, WANG Jing. Department of Ophthalmology, First Hospital of Zhejiang University, Hangzhou 310003
【Abstract】 Objective To study the expression of human leukocyte antigen DR (HLA-DR) and intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) in normal and pathological corneas and their significance in corneal inflammation and rejection after keratoplasty.Methods The expression of HLA-DR and ICAM-1 were detected in 10 normal corneas and 48 pathological corneas by using immunohistochemical techniques. Results HLA-DR and ICAM-1 were not expressed or only slightly expressed in normal corneas and markedly expressed in pathological corneas, especially in inflammatory corneas. In general, HLA-DR and ICAM-1 were co-expressed in similar regions. The expression rates of HLA-DR and ICAM-1 in the 7 cases of keratoplasty rejection were higher than that in the 21 cases of non-rejection.Conclusion The overexpression of HLA-DR and ICAM-1 is related to corneal inflammation and can promote the occurrence of keratoplasty rejection.
【Key words】 Cornea Human leukocyte antigen, DR molecule Intercellular adhesion molecule-1 Immunohistochemistry
人类白细胞抗原DR分子（human leucocyte antigen DR，HLA-DR）是抗原提呈细胞（antigen presenting cell，APC）发挥抗原提呈作用的关键分子，对启动和促进免疫反应至关重要。细胞间粘附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）作为重要的细胞粘附分子（cellular adhesion molecule，CAM），可参与细胞的识别与粘附，是白细胞积聚和淋巴细胞活化不可缺少的免疫分子［1］。我们应用免疫组化技术，对10例正常人角膜和48例患者病变角膜的HLA-DR和ICAM-1进行检测，探讨HLA-DR及ICAM-1对角膜炎性反应和移植排斥反应的作用及影响。
资料和方法
一、对象
48例角膜病变患者的角膜，男27例，女21例；年龄16～62岁；其中20例取自本院门诊因角膜病变或合并角膜病变而摘除的眼球，28例为本院住院患者中穿透性角膜移植术（penetrating keratoplasty，PKP）后取下的病变角膜。正常人角膜10例，取自20～46岁男性非正常死亡后摘除的健康眼球。眼球摘除者取全角膜。全部标本均在离体后1～6 h保存于-70℃深低温冰箱内备用。
二、标本制备和检测方法
1.每个标本冰冻连续切片20～30张，片厚5～7 μm。室温干燥，冷丙酮固定。
2.免疫组化染色：采用过氧化物酶标记的链霉菌抗生物素蛋白免疫组化染色法（streptavidin-peroxidase conjugated method,SP法）。一抗为HLA-DR和ICAM-1鼠抗人单克隆抗体，分别为美国Santa Cruz公司和ZYMED公司产品。二抗为生物素化的IgG，三抗为辣根过氧化物酶标记的卵白素。SP试剂盒为ZYMED公司产品。阴性对照以磷酸盐缓冲液（PBS）取代一抗完成；阳性对照为皮肤银屑病标本。以DAB酶底物显色剂显色，苏木素复染，常规脱水、透明后封片。各组标本制作条件一致。同时，各标本制作HE染色片各2张。
3.免疫组化染色结果判断和评定：光镜观察，以细胞膜呈棕黄色着色为阳性细胞，其结果评定采用等级评分法［2］：细胞膜边界清晰，无特异性着色者为阴性(-)；细胞膜轻度特异性着色，呈浅棕黄色者为弱阳性(+)；细胞膜中度特异性着色，呈棕色者为中度阳性(++)；细胞膜明显着色，呈深棕色者为强阳性(+++)。
4.统计学处理：本文数据采用χ2检验
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