讨论

　　1.NF-κB存在于人角膜基质细胞：本研究结果表明，NF-κB存在于人角膜基质细胞中，能够被脂多糖激活，转移入细胞核内，成为能够与特定序列DNA结合的活性形式。基质层占角膜厚度的9/10，其中含有多种细胞因子的受体，可表达IL-6等多种炎性因子，病原体侵入后，免疫反应主要发生在此层^［6，7］。因此，经致炎因素脂多糖刺激后，NF-κB在基质细胞中的表达变化对于整个角膜而言，具有一定的代表性。已有学者发现，角膜上皮内的花生四烯酸代谢物诱发炎症及角膜新生血管的作用与NF-κB有关^［8］。Yoshida等^［9］报道，缺氧可激活视网膜色素上皮细胞内的NF-κB，诱导包括IL-8在内的多种炎性因子基因表达，促进视网膜色素上皮细胞增殖和新生血管形成，导致视力丧失。NF-κB在人角膜基质中的表达情况是本研究所要解决的问题。

　　脂多糖是细菌降解的产物之一，是重要的致炎因子。经免疫细胞化学、流式细胞计数检测发现：体外培养处于G₀期的人角膜基质细胞表达较低量的NF-κB(阳性率9.4%)经脂多糖刺激后，表达水平明显增高(阳性率30.0%)。这证明细胞在应激状态下表达NF-κB增多，间接说明此过程中NF-κB有可能被活化。只有转移到细胞核内的NF-κB才可能发挥基因转录调节作用。我们应用凝胶迁移率试验对提取的核蛋白进行检测，进一步证明了在脂多糖作用后，角膜基质细胞内出现了具有DNA结合活性的NF-κB。

　　2.人角膜基质细胞内NF-κB活化的意义：NF-κB活化的意义在于，它是一种重要的基因转录调节蛋白，能快速接受外界信息，活化后进入细胞核，与靶基因结合，调控细胞粘附分子、白介素等多种细胞因子的转录，是炎症、免疫和急性期反应的核心调控因素^［1］。近年来，人们发现了许多种与角膜疾患有关的细胞因子，它们相互影响，难于辨别何者作用更重要。核转录因子作为细胞粘附分子、免疫受体、一氧化氮合成酶等多种基因转录的调控因素，其作用不能不引起人们的重视。本研究初步探讨了人角膜基质细胞内NF-κB的表达情况，为进一步明确其在角膜疾患中的作用，从而为利用其建立一种筛选新药的有效手段奠定基础。

　　参考文献

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　　[2]　Blackwell TS, Holden EP, Blackwell TR, et al. Cytokine-induced neutrophil chemoaattractant mediates neutrophilic alveolitis in rats: association with nuclear factor kappa B activation. Am J Respir Cell Mol Biol, 1994,11：464-472.

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　　[5]　Ausubel FM, Brent R, Kingston RE, et al. Short protocols in molecular biology 2nd ed. New York: Wiley, 1992.12-5.

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　　[8]　Schwartzman ML, Stoltz RA, Rapcon MM, et al. Rapid and sterospecific activation of NF-κB by a corneal angiogenic eicosanoid in microvessel endothelial cells. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1994,35：1466-1469.

　　[9]　Yoshida A, Yoshida S, Hata Y. Expression of NF-κB in retinal neovascularization possible involvement of IL-8. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1997,38(Suppl)：S611.

(收稿：1998-03-06　　修回：1998-09-20)

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