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2 结果
2.1 成纤维细胞的电镜观察
经传代培养的成纤维细胞用常规方法固定，行透视电镜观察，结果从图1、2可见，纤维细胞生长良好，细胞间可见胶原纤维。
    
1 成纤维细胞电镜图（×10000）
    
图2 成纤维细胞电镜图（×35000）
2.2 MTT法测定成纤维细胞的生长活性
经传代培养生长良好的成纤维细胞，调整细胞浓度为1×106／ml、5×105／ml、2.5×105／ml、1×105／ml、5×104／ml、2.5×104／ml，分别加入96孔培养板中，每孔100μl，每个浓度4孔。培养24h加入50μlMTT（2mg／ml），继续培养4h，离心5min，500r／min弃上清液加入DMSO 200μl溶解甲月替，用∑960全自动酶标仪测OD550nm值，结果可见：在每孔2.5×103～1×105范围内线性良好。
2.3 EGF、TGF－β1、FN对角膜成纤维细胞生长的影响作用
不同EGF浓度对成纤维细胞作用不同，在低浓度0.001μg／ml未见促生长作用，在0.01～1.0μg／ml时，具有明显促生长作用（P＜0.001），其最佳浓度为0.1μg／ml，而在高浓度10.0μg／ml时却具有明显生长抑制作用（P＜0.05），TGF－β1和FN未见明显促生长作用（P＞0.05）。（附表）
附表 EGF、TGF-β1、FN对角膜成纤维细胞生长的影响作用（ ±s，n＝3）
| 细胞因子 |
浓 度 |
| 0 |
0.001 |
0.01 |
0.1 |
1.0 |
10.0 |
| EFG(μg/ml) |
0.541±0.012 |
0.551±0.018 |
0.676±0.034* * * |
0.725±0.044* * * |
0.647±0.022* * * |
0.493±0.019* |
| TGF-β1
(ng/ml) |
0.541±0.012 |
— |
0.542±0.010 |
0.496±0.027 |
0.507±0.032 |
0.531±0.029 |
| FN(mg/ml) |
0.541±0.012 |
— |
0.572±0.025 |
0.552±0.019 |
0.557±0.018 |
0.549±0.026 |
与0浓度组比较：* P＜0.05,* * *P＜0.001
3 讨论
角膜基质成纤维细胞能分泌胶质纤维，胶质纤维基质对角膜上皮细胞生长具有重要作用，此外它还能分泌TGF[2]和FN[3]，而TGF和FN能明显促进角膜上皮细胞生长。我们在研究EGF对角膜上皮细胞生长作用发现EGF需要角膜基质或FN存在下才能明显促进角膜上皮细胞生长[1]，为了研究细胞因子对角膜上皮细胞生长作用机理，本文研究了细胞因子对角膜基质成纤维细胞的生长作用，结果发现EGF能促进纤维细胞生长，而高浓度时却抑制其生长，表明EGF对角膜上皮细胞的生长作用除在胶原基质或FN存在下直接刺激其生长作用外，还可存在调节刺激成纤维细胞的生长，可能使其分泌FN、TGF－β1，促进其生长；而TGF－β1和FN却对成纤维细胞无明显促生长作用，表明TGF－β和FN只能通过直接角膜上皮细胞生长而发挥作用。此外本实验用MTT法测定成纤维细胞生长活性，具有简便、准确的特点。
参考文献
[1] 陶志华，沈炳棣，朱涛. 表皮生长因子对兔角膜上皮细胞生长作用的实验研究. 中西医结合眼科杂志，1997，15（2）∶65
[2] Strissel KJ. Corneal epitbelial inhibitor of stromal cell collagenase sythesis identified as TGF－beta. Invest Ophthalmol Vis Sic，1995，36（1）∶62～151
[3] 曲萱（综述）. 纤维连接蛋白及其在眼科的应用. 国外医学（眼科分册），1988，4∶197
（收稿：1997－12－16）*011*ChinJOptomOphthalmol1999，Vol.1，No.2 上一页 [1] [2] |
