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细胞因子对角膜成纤维细胞生长的作用

http://www.cnophol.com 2008-11-25 15:26:16 中华眼科在线

  2 结果

  2.1 成纤维细胞的电镜观察

  经传代培养的成纤维细胞用常规方法固定,行透视电镜观察,结果从图1、2可见,纤维细胞生长良好,细胞间可见胶原纤维。

1 成纤维细胞电镜图(×10000)

图2 成纤维细胞电镜图(×35000)

  2.2 MTT法测定成纤维细胞的生长活性

  经传代培养生长良好的成纤维细胞,调整细胞浓度为1×106/ml、5×105/ml、2.5×105/ml、1×105/ml、5×104/ml、2.5×104/ml,分别加入96孔培养板中,每孔100μl,每个浓度4孔。培养24h加入50μlMTT(2mg/ml),继续培养4h,离心5min,500r/min弃上清液加入DMSO 200μl溶解甲月替,用∑960全自动酶标仪测OD550nm值,结果可见:在每孔2.5×103~1×105范围内线性良好。

  2.3 EGF、TGF-β1、FN对角膜成纤维细胞生长的影响作用

  不同EGF浓度对成纤维细胞作用不同,在低浓度0.001μg/ml未见促生长作用,在0.01~1.0μg/ml时,具有明显促生长作用(P<0.001),其最佳浓度为0.1μg/ml,而在高浓度10.0μg/ml时却具有明显生长抑制作用(P<0.05),TGF-β1和FN未见明显促生长作用(P>0.05)。(附表)

附表 EGF、TGF-β1、FN对角膜成纤维细胞生长的影响作用(±s,n=3)

细胞因子 浓    度
0 0.001 0.01 0.1 1.0 10.0
EFG(μg/ml) 0.541±0.012 0.551±0.018 0.676±0.034* * * 0.725±0.044* * * 0.647±0.022* * * 0.493±0.019*
TGF-β1

  (ng/ml)

0.541±0.012 0.542±0.010 0.496±0.027 0.507±0.032 0.531±0.029
FN(mg/ml) 0.541±0.012 0.572±0.025 0.552±0.019 0.557±0.018 0.549±0.026

与0浓度组比较:* P<0.05,* * *P<0.001

  3 讨论

  角膜基质成纤维细胞能分泌胶质纤维,胶质纤维基质对角膜上皮细胞生长具有重要作用,此外它还能分泌TGF[2]和FN[3],而TGF和FN能明显促进角膜上皮细胞生长。我们在研究EGF对角膜上皮细胞生长作用发现EGF需要角膜基质或FN存在下才能明显促进角膜上皮细胞生长[1],为了研究细胞因子对角膜上皮细胞生长作用机理,本文研究了细胞因子对角膜基质成纤维细胞的生长作用,结果发现EGF能促进纤维细胞生长,而高浓度时却抑制其生长,表明EGF对角膜上皮细胞的生长作用除在胶原基质或FN存在下直接刺激其生长作用外,还可存在调节刺激成纤维细胞的生长,可能使其分泌FN、TGF-β1,促进其生长;而TGF-β1和FN却对成纤维细胞无明显促生长作用,表明TGF-β和FN只能通过直接角膜上皮细胞生长而发挥作用。此外本实验用MTT法测定成纤维细胞生长活性,具有简便、准确的特点。

  参考文献

  [1] 陶志华,沈炳棣,朱涛. 表皮生长因子对兔角膜上皮细胞生长作用的实验研究. 中西医结合眼科杂志,1997,15(2)∶65

  [2] Strissel KJ. Corneal epitbelial inhibitor of stromal cell collagenase sythesis identified as TGF-beta. Invest Ophthalmol Vis Sic,1995,36(1)∶62~151

  [3] 曲萱(综述). 纤维连接蛋白及其在眼科的应用. 国外医学(眼科分册),1988,4∶197

(收稿:1997-12-16)*011*ChinJOptomOphthalmol1999,Vol.1,No.2

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(来源:互联网)(责编:duzhanhui)

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