2 结果
2.1 成纤维细胞的电镜观察
经传代培养的成纤维细胞用常规方法固定,行透视电镜观察,结果从图1、2可见,纤维细胞生长良好,细胞间可见胶原纤维。
1 成纤维细胞电镜图(×10000)
图2 成纤维细胞电镜图(×35000)
2.2 MTT法测定成纤维细胞的生长活性
经传代培养生长良好的成纤维细胞,调整细胞浓度为1×106/ml、5×105/ml、2.5×105/ml、1×105/ml、5×104/ml、2.5×104/ml,分别加入96孔培养板中,每孔100μl,每个浓度4孔。培养24h加入50μlMTT(2mg/ml),继续培养4h,离心5min,500r/min弃上清液加入DMSO 200μl溶解甲月替,用∑960全自动酶标仪测OD550nm值,结果可见:在每孔2.5×103~1×105范围内线性良好。
2.3 EGF、TGF-β1、FN对角膜成纤维细胞生长的影响作用
不同EGF浓度对成纤维细胞作用不同,在低浓度0.001μg/ml未见促生长作用,在0.01~1.0μg/ml时,具有明显促生长作用(P<0.001),其最佳浓度为0.1μg/ml,而在高浓度10.0μg/ml时却具有明显生长抑制作用(P<0.05),TGF-β1和FN未见明显促生长作用(P>0.05)。(附表)
附表 EGF、TGF-β1、FN对角膜成纤维细胞生长的影响作用(±s,n=3)
细胞因子 |
浓 度 |
0 |
0.001 |
0.01 |
0.1 |
1.0 |
10.0 |
EFG(μg/ml) |
0.541±0.012 |
0.551±0.018 |
0.676±0.034* * * |
0.725±0.044* * * |
0.647±0.022* * * |
0.493±0.019* |
TGF-β1
(ng/ml) |
0.541±0.012 |
— |
0.542±0.010 |
0.496±0.027 |
0.507±0.032 |
0.531±0.029 |
FN(mg/ml) |
0.541±0.012 |
— |
0.572±0.025 |
0.552±0.019 |
0.557±0.018 |
0.549±0.026 |
与0浓度组比较:* P<0.05,* * *P<0.001
3 讨论
角膜基质成纤维细胞能分泌胶质纤维,胶质纤维基质对角膜上皮细胞生长具有重要作用,此外它还能分泌TGF[2]和FN[3],而TGF和FN能明显促进角膜上皮细胞生长。我们在研究EGF对角膜上皮细胞生长作用发现EGF需要角膜基质或FN存在下才能明显促进角膜上皮细胞生长[1],为了研究细胞因子对角膜上皮细胞生长作用机理,本文研究了细胞因子对角膜基质成纤维细胞的生长作用,结果发现EGF能促进纤维细胞生长,而高浓度时却抑制其生长,表明EGF对角膜上皮细胞的生长作用除在胶原基质或FN存在下直接刺激其生长作用外,还可存在调节刺激成纤维细胞的生长,可能使其分泌FN、TGF-β1,促进其生长;而TGF-β1和FN却对成纤维细胞无明显促生长作用,表明TGF-β和FN只能通过直接角膜上皮细胞生长而发挥作用。此外本实验用MTT法测定成纤维细胞生长活性,具有简便、准确的特点。
参考文献
[1] 陶志华,沈炳棣,朱涛. 表皮生长因子对兔角膜上皮细胞生长作用的实验研究. 中西医结合眼科杂志,1997,15(2)∶65
[2] Strissel KJ. Corneal epitbelial inhibitor of stromal cell collagenase sythesis identified as TGF-beta. Invest Ophthalmol Vis Sic,1995,36(1)∶62~151
[3] 曲萱(综述). 纤维连接蛋白及其在眼科的应用. 国外医学(眼科分册),1988,4∶197
(收稿:1997-12-16)*011*ChinJOptomOphthalmol1999,Vol.1,No.2 上一页 [1] [2] |