眼视光学杂志 1999年第2期第1卷 近视眼研究

作者：肖林　刘鼎新　陈瑞英　郭静秋　张秀敏　刘晶　袁俊彦

单位：肖林　张秀敏　刘晶　袁俊彦（北京铁路总医院眼科　100038）；刘鼎新（北京医科大学细胞生物系）；陈瑞英　郭静秋（北京医科大学第一医学院小儿眼科）

关键词：近视；多巴胺受体；放射自显影

　　摘　要　目的：通过放射自显影方法对比研究鸡视网膜多巴胺受体在近视及正常状态下的分布。方法：取正常鸡和实验性近视鸡眼球，去角膜及眼内容物后速冻，做12μm冷冻切片，分三组：[³H]SCH 23390标记D₁组，[³H]Spiperone标记D₂受体组，非特异性竞争组，行放射自显影研究。结果：鸡视网膜D₁、D₂受体分布不同，D₂受体分布有明显的区域性，D₁不明显；近视状态下D₁、D₂受体数目增多，D₂增多更明显。结论：视网膜多巴胺受体两种亚型均参与近视的调控，数目增多与近视视网膜多巴胺生物水平下降有关。

Autoradiography on correlation of dopamine receptor and myopia

Xiao Lin，Liu Dingxin，Chen Ruiying，et al. Beijing General Railway Hospital，Beijing 100028

　　Abstract　Objective：To investigate dopaminergic mechanism on myopia by means of autoradiography(ARG)，To study distributions of dopamine(DA)D₁ and D₂ receptors in chicken retina in vitro and to compare DA receptors in myopic and normal chicks.Methods：[³H]SCH 23390，D₁ receptor radiolabeled ligand；[³H]Spuperone，D₂ receptor ligand，(+)-butaclamol，nonspecific binding. The fresh eyecups of myopic(Lid sutured)and normal chicks were frozen on dry ice. The 12μm thick tissue sections were taken，incubated，washed and dried. ARG exposure took 6～12 weeks for [³H] SCH 23390 and 1～6 weeks for [³H] Spiperone.Results：Specific [³H] SCH 23390binding(D₁)was found over all the retina，the difference of local distribution was not obvious. Specific [³H] Spiperone binding(D₂)was distributed throughout the retina with very high density over photoreceptor and retinal pigment epithelium. Both retinal DA receptors numbers (binding sites) in myopic chick were more than normal.Conclusion：The distribution of DA receptors in chicken retina are different. The increase of both DA receptors in myopic is relatied to the reduction of DA in chick retina in myopia. It indicates that both DA receptors media retinal DA affect the development of myopia.

　　Keywords　Myopia　DA－receptor　ARG

　　在近视的研究中，人们发现视网膜多巴胺系统参与实验性近视———剥夺性近视（Form deprivation myopia，FDM）的形成与发展^[1]。但是多巴胺（Dopamine，DA）受体相应的变化还不清楚，DA是脊椎动物视网膜上主要的神经活性物质之一，通过DA受体起着神经递质和神经调控的作用。DA受体分为许多亚型，最常用的为D₁（能被DA激活，增加环磷酸腺苷酶活力，使cAMP水平上升）和D₂（无上述作用）。本研究用放射自显影（Autoradiogroph，ARG）方法标记鸡视网膜DA受体结合位点，分析近视状态下DA受体的改变，为进一步探讨近视的发病机理提供一条途径。

　　1　材料和方法

　　1.1　材料

　　[³H]SCH 23390（88ci／mmol）和[³H]Spiperone（97ci／mmol）购自Amershem公司，（+）－butaclamol、Keneseriae购自RBI公司，北京白鸡（北京种禽公司），冲洗缓冲液50mmol^.L^-1、Tris－HCl，pH7.4，内含120mmol^.L^-1NaCl，5mmol^.L^-1KCl，2mmol^.L^-1CaCl₂，1mmol^.L^-1MgCl₂，反应液再加入0.1％抗坏血酸和1mmol^.L^-1EDTA－Na₂，[³H]Spiperone反应液另加2μmol^.L^-1Ketaserine。

　　1.2　方法

　　①缝合眼睑致小鸡剥夺性近视（FDM），并设正常对照^[2]。

　　②冷冻切片的制作：随机取每组鸡，断头术处死后分组立即取眼球，冰台上切除眼前节，去除晶状体及玻璃体，将眼球壁分为鼻颞侧两部分，将颞侧半立即包埋在OCT（组织包埋液）中，干冰中速冻后放置－20℃下，二日内做冷冻切片，厚度12μm，粘附在涂有明胶的载玻片上，贮存在－20℃（24小时内）。同一玻片上粘贴正常鸡和近视鸡二种视网膜。保证其在操作过程中的相同条件。

　　③ARG^[3，4]将切片放在室温下“温化”，分二组，一组为[³H]SCH 23390标记组，一组为[³H]Spiperone标记组。每组相邻切片做非特异结合竞争组，加（+）－butaclamol，见附表。

附表　鸡视网膜DA受体ARG流程表

　　* 非特异竞争组干燥切片分两组再重复D₁或D₂标记流程。

　　将切片移至暗室内，粘附涂有核乳胶盖玻片，夹紧，贮存在4℃干燥暗盒内曝光，曝光时间[³H]SCH 23390标记6～12周，[³H]Spiperone 1～6周。

　　曝光后进行显影、定影处理，再行苏木精染色，树胶固定。光学显微镜下观察银粒分布（受体结合位点）。

[1] [2] 下一页