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3 讨论
晶状体起源于外胚层，仅由上皮细胞及其产物构成，并通过基底膜与其它细胞完全分离。故离体培养的晶状体上皮细胞不易受到其它细胞的污染，适用于研究细胞生长、分化及蛋白合成等功能。自1969年Mayer首次建立了晶状体上皮细胞离体培养技术以来，一些学者对人及某些动物的晶状体上皮细胞做了离体培养［4］。
离体培养晶状体上皮细胞的主要困难是晶状体囊膜小，用消化法难以获得大量细胞，组织块培养如长时间不能贴壁，亦将导致细胞死亡。为促使组织块贴壁，改进的组织块培养法将囊膜片置于培养瓶底后，倒转培养瓶，使加入的培养基不接触囊膜片，放置一定时间再将培养瓶翻转回位，使培养基覆盖囊膜片。其意义在于，既不会使囊膜片干燥，又促进其贴壁［5］。李秋明［6］将前囊膜剪碎后加入纯胎牛血清和冰冻过的新生牛晶状体皮质，密封培养24～48h后，再添加培养基，提高了人晶状体上皮细胞原代培养的成功率。为减少操作步骤，同时又避免倒转培养瓶促囊膜片贴壁的时间难于把握，本实验将囊膜碎片铺于瓶底后，加入少量培养基(3～5ml)，使培养基刚好盖过囊膜片，使膜片既不干燥又不致漂浮。发现原代培养接种后1～2天，囊膜片即可贴壁，并有细胞从膜片边缘向外长出，再补加含血清培养基，细胞生长良好。我们还发现，取新生牛晶状体用于实验，同时用含20％胎牛血清的培养基，较用成年牛晶状体或使用低于20％的胎牛血清细胞更易于生长。
MTT法测定活细胞及细胞增殖，是基于黄色的MTT能被活细胞线粒体脱氢酶(如琥珀酸脱氢酶和心肌黄酶)还原成蓝色的甲NB171（Formazan)，从而可用比色法推测细胞密度。而死细胞无此能力。甲NB171产生的量与细胞数成正比，活化的细胞比静止的细胞产生更多的甲NB171，其最大优点是不需要任何洗涤步骤即可在酶标仪上快速分析和测定大量样品［3］。本实验用MTT法测定晶状体上皮细胞生长曲线与传统的细胞计数法所测细胞生长曲线基本一致。MTT比色法较计数法更具有客观性和准确性，值得在临床推广应用［7］。
目前，成功地建立并改进晶状体上皮细胞的离体培养方法，为研究晶状体上皮细胞的形态和功能，探讨其在白内障及后发障中的作用，以及筛选防治白内障及后发障的有效药物，提供了有价值的实验手段。
参考文献：
1．张可杰，李绍珍．晶体上皮细胞的功能和形态学研究.国外医学*眼科学分册，1994，18(6)∶ 327
2．司徒镇强，吴军正．细胞培养．北京：世界图书出版公司，1996.175-177
3．郑永唐，贲昆龙．测定细胞存活和增殖的MTT方法的建立．免疫学杂志，1992，8(4)∶ 266
4．Bermarch G，Mayer U，Naumann GOH．Human lens epithelial cells in tissue culture．Exp Eye Res，1991，52∶ 113
5．Jaccob TJC．Human lens epithelial cells in culture∶ a quantitative evaluation of growth rate and proliferative capacity．Exp Eye Res，1987，45∶ 93
6．李秋明．添加晶体皮质提高晶体上皮细胞原代培养成功率．眼科研究，1997，15（1）∶ 5
7．张敏，张效房，高晓东，等．MTT比色法测定药物对晶体上皮细胞增殖的影响．眼科研究，1997，15（4）∶ 233
收稿：2000－03－27
修回：2000－05－20 上一页 [1] [2] [3] |
