眼科研究 2000年第4期第18卷 实验研究
作者：李文生 牟奇芸 王家翠 邵文萍
单位：李文生（410011 长沙，湖南医科大学第二附属医院眼科）；牟奇芸 王家翠 邵文萍（昆明医学院第一附属医院眼科）
关键词：血；房水；晶状体；抗氧化酶；抗氧化物
摘要 目的探讨正常犬血、房水、晶状体中抗氧化酶和抗氧化物在维持晶状体透明过程中的相关关系及作用。方法选用8～12kg健康成年杂种犬20只，雌雄不限。超氧化物歧化酶(SOD)用黄嘌呤氧化酶法测定，丙二醛(MDA)用巴比妥酸反应比色法测定，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)用改进的还原型谷胱甘肽消耗法，VitC和VitE分别用微量荧光法和比色法测定。结果SOD，GSH-PX，VitC，VitE及MDA在血、房水、晶状体中相互间存在26个明显相关方程(t检验，P＜0．01或P＜0．05)。结论在正常情况下，在犬血、房水、晶状体中抗氧化酶之间和抗氧化物之间以及二者之间存在相互协调、制约的动态平衡相关关系是保持晶状体透明的重要因素。
分类号 R776．1
A correlative study of antioxidases and antioxidants in the blood，aqueous
humor and lenses of normal dogs
Li Wensheng Mou Qiyun Wang Jiacui et al．
（Department of Ophthalmology，the Second Affiliated Hospital of Hunan Medical University，Changsha 410011）
Abstract ObjectiveTo investigate the antioxidases and the antioxidants which play a protective role in lenses and their correlations in the blood，aqueous humor and lenses of normal dogs．MethodsTwenty healthy adult male or female dogs（8～12 kg）were selected．The activity of superoxide dismutase（SOD）was measured with xanthine oxidase method.The content of malondialdehyde（MDA）was quantitated by barbituric acid reaction.The glutathione peroxide（GSH-PX）activity was measured with modified glutathione consumption assay，and the content of ascorbic acid（VitC）and alphatocopherol（VitE）were determined by microfluorescence method and chromometry respectively．ResultsThere were twenty-six correlative equations among the SOD，GSH-PX，MDA，VitC and VitE in the serum or plasma, aqueous humor and lenses of normal dogs．ConclusionThe positive interactive correlation of dynamic equilibrium of several parameters is important factor to maintain the transparent lenses．
Key words blood aqueous humor lenses antioxidases antioxidants
白内障的发病机理是一个相当复杂的课题，任何单一致病因素均难以解释其形成过程中复杂的病理及生化现象。抗氧化酶活性下降和抗氧化物含量减少在白内障形成过程中的作用受到重视［1，2］。而对于正常机体中抗氧化酶之间和抗氧化物之间以及二者之间有无相关性及其在维持晶状体透明方面起何作用，则未见报道。本研究通过测定正常犬血、房水、晶状体中的抗氧化酶超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxide，GSH-PX)和抗氧化物VitC、VitE及丙二醛(malondialdehyde，MDA)，力图分析它们之间的相关关系，从抗氧化损伤方面寻找维持晶状体透明的理论依据。
1 材料与方法
1．1 试剂与仪器 SOD，MDA，GSH-PX，VitC，VitE试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。721可见光分光光度计、离心机、37℃恒温水浴箱、玻璃匀浆器由上海医疗器械厂生产。
1．2 实验动物选择及标本取材 选用8～12kg健康成年杂种犬20只，均来自昆明医学院第二附属医院动物科，雌雄不限。术前禁食8h，肌注硫酸阿托品0．5mg／ml后，肌注基础麻醉合剂1．5～2ml(由盐酸哌替啶100mg／2ml，盐酸氯丙嗪50mg／2ml，盐酸异丙嗪50mg／2ml混合组成)，5min后，用2．5％硫喷妥钠0．5～1ml／kg缓慢静脉推注，约4s推注1ml，诱导麻醉直到麻醉第3期2级。取肘前抗凝静脉血和全血各3ml，抽取房水约0．65ml；随即作囊内摘出晶状体，在裂隙灯下证实晶状体透明完整，将晶状体用滤纸吸干后称重，上述标本在4℃冰箱内保存，12h内完成各项指标测定。
1．3 SOD，MDA，GSH-PX，VitC，VitE测定
1．3．1 SOD用黄嘌呤氧化酶法测定其活力高低，具体测定方法按试剂盒说明进行。简要步骤是：(1)取新鲜血清、房水、晶状体匀浆液各0．003ml；（2）波长550nm处比色计算SOD值。公式如下(单位U）：SOD＝（对照管吸光度－测定管吸光度)÷对照管吸光度×样品稀释倍数÷0．5
1．3．2 MDA采用巴比妥酸反应比色法，具体测定方法按试剂盒说明进行。简要步骤是：(1)取新鲜血清、房水、晶状体匀浆液各0．1ml；(2)蒸馏水调零，532nm处比色计算其浓度。公式如下(单位nmol／nl)：
MDA＝测定管(样品溶液)的吸光度÷对照管(标准溶液)的吸光度×10nmol／ml
1．3．3 GSH-PX采用改进的还原型谷胱甘肽(GSH)消耗法，具体测定方法按试剂盒说明进行。简要步骤是：(1)取血浆、房水、晶状体匀浆液各0．02ml，用水稀释到1ml（1∶ 50溶液)；（2）蒸馏水或空白管调零，420nm处1cm光径比色计算。公式如下(单位U)：GSH-PX＝（非酶管OD－样品管OD)×A×5÷3min×样品蛋白质的毫克数（A＝标准GSH浓度÷标准GSH吸光度）
1．3．4 VitC用微量荧光法测定，具体测定方法按试剂盒说明进行。简要步骤是：(1)取血浆、房水、晶状体匀浆液各0．125ml；（2）536nm处测OD值，空白管调零；(3)以质量浓度为横坐标，吸光度(OD）值为纵坐标绘制标准曲线；(4)计算斜率K值，即相对应的吸光度值除以相对应的质量浓度；(5)计算VitC质量浓度，公式如下(单位μg／ml）：
VitC＝样品管吸光度值÷标准管吸光度值×质量浓度的稀释倍数
1．3．5 VitE采用比色法测定，具体测定方法按试剂盒说明进行。简要步骤是：(1)取血清、房水、晶状体匀浆液上清液各0．1ml；(2)无水乙醇调零，533nm处测定吸光度。按下述公式计算(单位μg／ml)：
VitE＝（b＋ax）×稀释倍数(a＝相应质量浓度／相应吸光度，b＝0，x为样品所测得的吸光度)
1．4 统计学分析
将所得数据用计算机SPSS软件统计学处理，计算各组参数均值和标准差，正态检验各组数据均符合要求，然后行相关分析比较各测定指标之间有无相关性。
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