3讨论

    小梁细胞数目的减少被认为是青光眼发病机制之一，当青光眼并发炎症时可以通过多种机制引起小梁细胞数目的下降，如炎症细胞的吞噬作用、细胞迁移和死亡等[5]。而死亡可以由坏死和凋亡两种在分子水平上完全不同的机制引起，凋亡可以由配体与细胞膜表面上的受体特异性结合而诱导，也可以由凋亡抑制剂阻断。Wordinger等[4]已经证实人小梁细胞膜表面存在TNF受体-1，但是人小梁细胞是否存在TNF诱导的凋亡通路，国内外还没有报道。我们采用Annexin-ⅴ-FITC联合PI双染法流式细胞术，分析不同浓度rhTNF-α的诱导小梁细胞凋亡作用。其原理是，在细胞凋亡的早期，正常位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸（PS），可翻转到细胞膜的表面，与荧光素FITC标记的Annexin-ⅴ高亲和力特异性结合，从而可着染早期凋亡细胞。碘化丙啶(PI) 可以透过凋亡中晚期和死细胞的细胞膜，而使细胞核红染，而正常细胞对两种荧光标记均拒染。结果显示，rhTNF-α在浓度为0.01MU/L时就可以诱导体外培养的小梁细胞发生凋亡，凋亡百分数为3.65%，随着浓度的增加凋亡细胞数也逐渐增加，呈剂量依赖性。rhTNF-α浓度达到100MU/L时，凋亡细胞达到18.44%，而坏死的细胞数没有明显的差异。说明rhTNF-α可能主要是通过诱导凋亡引起细胞数目的下降，而不是坏死。

    正常人房水没有TNF-α，但眼部并发葡萄膜炎、糖尿病性视网膜病变时，房水内TNF-α水平增高，可达2～24mg/L[6] (相当于6～72MU/L)，足以引起小梁细胞明显的凋亡，从而引起小梁细胞数目的减少，加重原本已经存在的青光眼，或引起青光眼的发病。而且青光眼病人视网膜TNF-α及其受体表达增高,其介导的细胞死亡是青光眼性视神经损害的原因之一[7,8]。因此，阻断TNF-α诱导的凋亡通路，可能起到防治青光眼的作用。

   【参考文献】

1 Grierson I, Howes RC. Age related depletion of the cell population in the human trabecular meshwork. Eye, 1987; 1: 204-210

2 Grierson I, Hogg P. The proliferative and migratory activities of trabecular meshwork cells. Prog Retinal Eye Res, 1995; 15: 33-40

3刘兵,马吉献,惠延年.IL-1β和TNF-α对体外培养的人RPE细胞FasL蛋白及mRNA表达的影响.国际眼科杂志,2005;5(5):916-918

4 Agarwal R, Talati M, Lambert W, Clark AF, Wilson SE, Agarwal N, Wordinger RJ. Fas-activated apoptosis and apoptosis mediators in human trabecular meshwork cells. Exp Eye Res, 1999; 68: 583-590

5 Wordinger RJ, Clark AF, Agarwal R, Lambert W, Mcnatt L, Wilson SE, Qu Z, Fung BK. Cultured human trabecular meshwork cells express functional growth factor receptors. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1998; 39(9): 1575-1589

6 Franks WA, Limb GA, Stanford MR, Ogilvie J, Wolstencroft RA, Chignell AH, Dumonde DC. Cytokines in human intraocular inflammation. Curr Eye Res , 1992; 11(Suppl): 187-191

7贺翔鸽,李美玉.人眼小梁细胞培养及免疫组化特性研究.中华眼科杂志,1998;34(4):280-282

8 Tezel G, Li LY, Patil RV, Wax MB. TNF-alpha and TNF-alpha receptor-1 in the retina of normal and glaucomatous eyes. Invest Ophthalmol Vis Sci, 2001; 42(8): 1787-1794

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