【摘要】  目的：探讨光明液对实验性视网膜光损害大鼠模型的治疗作用。方法：SD大鼠32只随机分为4组：光明液组、模型组、正常组和VitE组。采用手术显微镜光源（Lux为30 000±50）照射SD大鼠右眼30 min，建立急性光损伤模型。分别采用光明液、VitE滴丸及等量蒸馏水进行灌胃治疗7d，观察细胞凋亡率、Caspase-3活力、NO含量变化及视网膜外核层厚度改变。结果：光明液可以明显降低视网膜细胞的凋亡率，有效地抑制细胞凋亡中的关键酶—Caspase-3蛋白酶的活力，还可一定程度减缓视网膜外核层厚度的改变，对具有细胞毒性和氧化作用的NO也有较强的降低作用。与抗氧化剂VitE相比，光明液的疗效要优于前者。结论：复方中药光明液是一种治疗视网膜光损害性疾病的有效的中药复方制剂。

   【关键词】  视网膜 损害 细胞凋亡 光明液 中药

    引言

    视网膜是人体重要的光感受器官，特别容易受到各种可见光或人工光源的损伤，高强度的光照射会导致视网膜的急性损伤。此概念早在柏拉图时代就已提出，但直到上世纪60年代，Noell等[1]才开始实验研究。1966年Noell曾报道，一定量的光，即使低于热损伤的阈值，也可引起小鼠的视网膜损伤。近年来，随着眼科光学诊疗器械和显微手术应用的增多，人们不仅对自然光，而且对各种器械的光源所导致的视网膜损伤等问题进行了深入的研究。另外，重复的光照射，即使强度较低，也可因光的蓄积作用而对视网膜产生损伤[2]，所以对视网膜光损伤的深入研究有着重要的临床和理论价值，但目前对此类疾病的治疗尚无理想的措施。为积极寻找能有效改善视网膜光损伤程度的、临床使用方便的、副作用较少的中成药注射液，我们利用显微手术的光源造成大鼠急性视网膜光损伤模型，来观察复方中药光明液对其的治疗作用，以期为对此类疾病的治疗寻找有效的防治方法。

    1材料和方法

    1.1材料  成年SD大鼠32只，雄性，体质量180～220 g，由广州中医药大学实验动物中心提供（粤检证字2003A028）随机分为4组：正常组，模型组，光明液组，维生素E组，每组8只。低温冷冻离心机（universal 16R型，美国Hettich Zentrifugen公司）；分光光度计（UV-1601型，日本shimadzu公司）； NO分析试剂盒（南京建成生物工程研究所）；流式细胞仪（美国Bekman Coulter公司Epics Elite型）。光明液（  党参15g、白术15g、茯苓20g、甘草8g、丹参30g、川芎30g）购于广州荔湾药材公司，煎取成1kg/L药液备用。VitE滴丸胶囊由广东中山市三才医药集团有限公司生产。光明液组及 VitE组均按成人临床用量（光明液4.5g/d；VitE 200mg/d）经折算后[3]的剂量进行灌胃治疗，其余两组灌等量蒸馏水，1次/d，7d为1个观察周期。到期后取材观察各项指标。

    1.2方法  大鼠10g/L戊巴比妥钠30mg/kg ip结合乙醚间断性吸入全麻[4]，复方托品酰胺充分散大右侧瞳孔，用苏州产YE-1型手术显微镜光源（150W，21V），光照度30 000±50Lux（光照度检测仪，上海），垂直照射大鼠瞳孔，照射时间为30min。在光照过程中，确保角膜完全暴露，不断滴生理盐水湿润眼球表面，工作温度保持在25℃左右。①Annexin V联合PI染色 视网膜组织剪碎后，加入PBS离心5min，然后加入2μL Annexin-V-fluorescein和100μL Hepes buffer，在25℃孵育15min，再离心5min后，弃上清加入2μL PI和100μL Hepes buffer，上流式细胞仪（美国Bekman Coulter公司Epics Elite型）检测。②Caspase-3活力测定 取视网膜后按试剂盒（Pharmingen产品，深圳晶美公司提供）要求进行，视网膜组织剪碎后，PBS清洗，置于冷的Cell Lysis Buffer中冰浴30min，然后加入AC-DEVD-AMC及HEPES BUFFER，37℃水浴1h后用日本Shimadzu公司RF-540型荧光分光光度计测定活力，激发波长为380nm，发射波长为420～460 nm。③NO的检测 脱颈椎法处死动物，迅速摘除眼球，在冰环境下剥离视网膜，以精密分析天平称视网膜湿重，再用双蒸水配成20g/L，匀浆。匀浆液3 000r/min离心15min，取上清液测NO含量按试剂盒操作说明，将NO转化为NO2-，显色法测定其含量。④视网膜外核层厚度测量 脱颈椎法处死动物，迅速摘除眼球，标本常规固定、脱水、包埋、修蜡，经视乳头颞侧旁开1mm纵向做5μm厚的切片，在显微镜下观察摄片，采用全自动图象分析系统（KONTRON IDAS公司2.0型，德国）测量外核层厚度。

    统计学处理：数据均以          表示，两组间均数差异采用t检验，SPSS统计软件协助处理。

    2结果

    我们采用流式细胞仪检测细胞凋亡率，光明液对大鼠光损伤模型细胞凋亡率的影响，见表1。光明液可降低Caspase-3蛋白酶的活力，光明液对大鼠光损伤模型Caspase-3活力的影响，见表2。经光明液、VitE治疗后，NO改变较为明显，光明液对大鼠光损伤模型NO影响，见表3。经过光明液和VitE治疗后外核层厚度变薄程度减缓，光明液对大鼠光损伤模型外核层厚度的影响，见表4。

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