眼表染色用1％虎红溶液比用虎红试纸效果好，因虎红试纸上的虎红不易被溶下，造成虎红浓度降低。Snyder等报告分别用润湿15秒、30秒、45秒的试纸，测定虎红的浓度，结果浸泡时间越长浓度越高，但均比1％虎红溶液浓度要低。

　　Van Bijsterveld等提出了虎红染料眼表染色的定量系统，可用于慢性眼表疾病患者。将眼表分三个区域：鼻侧球结膜、颞侧球结膜、角膜，每个区域计0～3分，0分为不染色，3分为强染色，整个累加为9分，每眼整体计分。根据此系统，干燥性角结膜炎常高于3.5分，在泪液缺乏的情况下，虎红着染睑结膜，在边沿出现三角形状。该定量系统有助于定量跟踪KCS患者。但仅依据该系统，与干眼有关的其他眼表疾病可能被误诊。

　　泪腺功能障碍导致的KCS，虎红结膜染色强于角膜(图4)。疾病初期，在鼻侧球结膜的暴露区域可能部分染色或不染色；在疾病中期，在鼻侧球结膜和球结膜的暴露区域均染色，通常鼻侧球结膜染色重于颞侧球结膜；疾病晚期，暴露的前部角膜也着染，随着病情的发展，整个角膜均染色。

　　睑板腺功能障碍即使泪液量正常，虎红也可染色上睑结膜，即使它没有暴露。炎症严重时，染色扩散并可影响到与结膜连接的角膜，较重的睑板腺功能障碍，虎红染色非常类似于晚期的KCS。

　　虎红染色患者常有明显的刺痛感，刺痛强度常与角膜上皮和结膜损伤程度成正比。为减少刺痛感，医生常使用表面麻醉剂。有些医生主张染色前不用表面麻醉，因会减少泪液分泌，增加刺激性。也有人反对用盐酸丁卡因作为麻醉剂，因会出现假阳性染色。而另一些医生认为这不是问题，坚持采用表面麻醉，以减轻其刺激性。

　　紫外线可引起虎红染色剂的催化反应，染色后在阳光照射下症状会加重，尤其是干眼较重者。在这种情况下，建议患者暂时处于避光环境。如果应用的虎红剂量不是过大，多数患者是可耐受的。但虎红染色强度与染色剂量相关，如果滴的量小，染色的强度也会减弱。所以一般建议在染色前还是先滴麻药以减少染色剂引起的刺痛感””。同时注意及时擦去多余的染色剂，以防眼部皮肤着色。

　　虎红的抗病毒性质及对细胞的毒性作用确切机制尚在研究中，推测是虎红结合到细胞核组蛋白上，因为实验中观察到它优先染色细胞核。

　　虎红眼表染色的缺点是：(1)具有刺激性，患者常有刺痛感；(2)对细胞具有潜在毒性作用；(3)虎红染色呈红色，对于眼部炎症发红，不易分辨染色情况。

　　四、丽丝氨绿B的临床应用

　　丽丝胺绿B(1issamine green B)是人工合成的具有两个氨基苯的有机化合物，因其无毒性和致癌性，美国食品药品管理局(FDA)已批准其作为药品、化妆品、食品的颜色填加剂。其别名包括酸绿S(acid green S)、羊绒绿S或C(wool green Sor C)、牢固亮绿(fast light green)。

　　已证明丽丝胺绿B是一种具有像虎红一样的染色效果又使患者无不适感的染料，较虎红具有较好的耐受性，在评估KCS时非常有效(图5)。丽丝氨绿B不染色健康的角膜上皮细胞，只染细胞膜损伤的细胞，并不抑制病毒再生，对人体组织无毒性和较好的耐受性，使得其在诊断眼表疾病中比虎红更有优势。但丽丝胺绿B的浓度不宜太大，Korb和Herman报告2％和3％的溶液仍使患者产生烧灼感。丽丝胺绿B具有较好的水溶性，使其可以制备溶液浸润的试纸条，更方便临床使用。

　　Kim和Foulks报告了虎红、丽丝胺绿B在体外培养中对人角膜上皮细胞的影响，实验显示丽丝胺绿B不染色增殖的人角膜上皮细胞，而虎红则着染这些细胞，影响这些细胞的活性(图6、7)。

　　丽丝胺绿B对因维生素A缺乏引起的结膜干燥症的染色效果，优于虎红。Korb和Herman报告了采用混合染色剂用于角结膜染色，如丽丝胺绿B和荧光素钠混合剂，虎红和荧光素钠混合剂，使其具有双重染色功能。Korb还评估了各种浓度染色剂的染色效果，认为2％荧光素钠溶液、0.5％或1.0％的虎红溶液、1.0％丽丝胺绿B溶液染色效果最好。2％荧光素钠与1.0％丽丝胺绿B混合制剂可以用于眼表的双重染色，这种混合染色剂有可能替代单一的染色剂，有望作为眼表疾病诊断的新型染色剂用于临床。Doughty等报告了用丽丝胺绿B染色球结膜表面与睑缘之间的Marx线，Marx线非常清晰(图8)。

　　五、其它染料

　　亚甲蓝(methylene blue)具有与虎红相似的染色性质，它可以染色细胞或黏液，但缺乏特异性，所以不建议在角膜染色中使用。台盼蓝(Trypan blue)只染色死亡或损伤的上皮细胞，推荐用于测定捐献角膜的适合性。阿辛蓝(Alcian blue)是一种含铜离子的染色黏液的特异染料，可用于辨别正常上皮细胞黏液不同的沉积物，因为染色后褪色时间长，不推荐用于角膜上皮细胞严重损伤者。天青ii(Azure ii)、亮甲酚蓝(cresyl blue)、尼克蓝(nile blue)、硫氰酸胺B(sulfohodamine B)作为活体染料也有报告，它们的临床应用尚需进一步研究。

　　总之，荧光素钠、虎红、丽丝胺绿B在眼表疾病的诊断中具有广泛的用途，它们均具有良好的水溶性，将其溶液浸润制成试纸条，经单独包装灭菌，临床应用非常方便。使用前仅需在眼表点一滴无菌平衡盐溶液或生理盐水，然后将试纸条平贴在眼表上，染色剂即可迅速溶下染色眼表。目前国外此类产品已广泛应用于临床。国内眼表染色临床报告较少，应积极开发眼表染色产品，使眼表染色成为眼表疾病诊断的有用方法。

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