张庆平 植玉婷 黄巨恩 周卫为 李校坤 广西医科大学第一附属医院眼科,广西 南宁 530021
摘要 目的:观察并比较不同浓度aFGF、 MaFGF对培养大鼠RGCs存活与生长的影响,并比较aFGF的神经保护活性对促有丝分裂活性的依赖程度。
方法: 将原代培养的RGCs接种于96孔培养板:(1)Thy-1单克隆抗体鉴定、免疫阳性细胞计数、有计算轴突生长细胞百分率;(2)实验分为对照组(DMEM培养液),25ng/ml、100ng/ml、400ng/ml aFGF组(A1组、A2组、A3组)和25ng/ml、100ng/ml、400ng/ml MaFGF组(B1组、B2组、B3组),记录RGCs存活时间;(3)将培养3、5、7d的RGCs通过 MTT法测量吸光度(A)值。
结果:(1)培养第3d,大部分存活细胞为Thy-1单克隆抗体反应阳性, 5、7d后阳性细胞数逐渐减少。培养第3d,实验各组和对照组比较,免疫阳性细胞数及有轴突生长的细胞比率均无明显差异(均P>0.05),而培养第5、7d,差异均有统计学意义(均P<0.05);(2)细胞存活期间各实验组和对照组细胞大小及形态均无明显差别,实验组比对照组细胞存活时间长3-4d;(3)培养第3、5、7d,MTT法测量吸光度(A)值:培养第3d,A、B各浓度组A值与对照组比较均无显著性差异(均P>0.05),而培养第5、 7d,差异均有统计学意义(均P<0.01);相同培养天数的A1组与A2组比较,及A2与A3组比较,A2比A1、A3较高,差异均有统计学意义(均P<0.05); A1组与A3组比较,无显著性差异(P>0.05);相同培养天数的B1组与B2组比较,及B2组与B3组比较,B2比B1、B3较高,差异均有统计学意义(均P<0.05); B1组与B3组比较,无显著性差异(P>0.05);相同浓度的aFGF各组与MaFGF各组比较,在相同培养天数时差异均无统计学意义(均P>0.05)。
结论:(1)aFGF、 MaFGF均能促进培养大鼠RGCs的存活,并能延长RGCs的存活时间,且对RGCs的大小、形态无影响;(2)aFGF保护及促进RGCs存活的作用不依赖其有丝分裂活性。
关键词:酸性成纤维细胞生长因子;改构型酸性成纤维细胞生长因子;视网膜神经节细胞;细胞培养
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