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视网膜神经胶质细胞和色素上皮细胞是视网膜神经元细胞的主要滋养来源[6，7]。将来源于视网膜神经上皮的细胞混合培养时，其中的神经节细胞较纯化的神经节细胞存活时间延长,突触联系增多，这说明了神经胶质细胞在节细胞生长中的重要性，但是在神经上皮细胞单独培养体系中，所有细胞的形态一致，没有显示出继续分化，成熟的迹象，即使将这些细胞和视网膜色素上皮细胞分层共培养，接受到色素上皮细胞的物质滋养来源，细胞也仅是在存活时间和轴突长短上有进一步的延长，仍未走向成熟分化[8]。
视网膜组织在体内有着特殊的组成和分层样立体结构,因此我们进一步将神经细胞接种在已经融合成层的色素上皮细胞上，从而使细胞在一个立体结构上也与体内相似的环境中生长。在这种分层接触共培养的体系中，视网膜神经细胞不仅突触联系增多，突触联系的形式也多发生在单个细胞间，表现出了一种与体内相似的神经细胞间的信号传递方式，而且细胞形态发生了多样化的改变，显示出了细胞分化后的异质性[9]。遗憾的是，接种在色素上皮细胞上的神经细胞与其下层细胞的连接非常疏松，染色过程中的轻微漂洗便可使其脱落，因此尚无法对这些细胞的分化走向进行定性。尽管如此，视网膜神经节细胞在各不同环境中的表现差异提示了细胞的离体培养环境对细胞生物学特性的影响，这种影响可能会导致对细胞各种性能的差别理解。
图1出生1d天的乳鼠视网膜神经上皮细胞混合培养1wk时，Thy-1染色标记神经节细胞，神经节细胞的阳性率在50%左右，部分神经节细胞有轴突伸出和联系，但有较长轴突的细胞并不是神经节细胞（bar=20mm） 图2 纯化的视网膜神经节细胞培养2d时Thy1染色，可见细胞的阳性着染率在90% 以上,胞浆和细小的突起呈阳性着色 图3相差显微镜下，来源于出生1d乳鼠视网膜神经上皮的细胞混合培养1wk，细胞胞体形态一致，有突触联系，但突触联系发生在成簇生长的细胞间（bar=20mm） 图4用Thy1单克隆抗体吸附纯化的神经节细胞培养2d时，可见细胞分散，有细小的突起伸出（bar=10mm） 图5未纯化的视网膜神经细胞与视网膜色素上皮细胞分层共培养1wk时，可见细胞间的突触联系增多，单个细胞间也出现突触联系，但细胞胞体的形态仍基本一致（bar=20μm） 图6未纯化的视网膜神经细胞与视网膜色素上皮细胞接触共培养1wk时，可见视网膜神经细胞疏松贴附于融合成层的色素上皮上，立体感强，单个细胞间的突触联系增多，而且细胞胞体的形态不一致，发生了较大变化（bar=20μm） 图7纯化的视网膜神经节细胞和视网膜色素上皮细胞分层共培养3d时，细胞伸出的突起略长于细胞单独培养时（bar=10μm） 图8纯化的视网膜神经节细胞和视网膜色素上皮细胞接触共培养3d时，神经节细胞的突触明显变长，细胞间的突触联系增多（bar=10μm）
【参考文献】
1 Shatz CJ, OLeary DD. Repair and replacement to restore sight. Report from the Panel on Ganglion Cell/Connectivity. Arch Ophthalmol1993;111(4):472 477
2 Lindsey JD , Weinreb RN. Survival and differentiation of purified retinal ganglion cells in a chemically defined microenvironment. Invest Ophthalmol
Vis Sci1994;35:36403648
3 Takahashi N, Cummins D, Caprioli J. Rat retinal ganglion cells in culture. Exp Eye Res1991;53(5):565 572
4 Sernagor E, Eglen SJ, Wong RO. Development of retinal ganglion cell structure and function. Prog Retin Eye Res2001;20(2):l39 174
5尹小磊,叶剑,陈春林.新生SD大鼠视网膜神经节细胞体外原代培养.国际眼科杂志2006;6(5):1008 1010
6 Xiong WC, Montell C. Defective glia Induce neuronal apoptosis in the repo visual system of drosophila. Neurology1995;14:581590
7 Bahr M, Przyrembel C, Bastmeyer M. Astrocytes from adult rat optic nerves are nonpermissive for regenerating retinal ganglion cell axons. Exp Neurol1995;131(2):211
8 Hrisch S, Bahr M. Immunocytochemical characterization of reactive optic nerve astrocytes and meningeal cells. Glia1999;26(1):36
9 Lu SH, Liu L. Pharmacological neuroprotection on retinal ganglion cells. Int J Ophthalmol(Guoji Yanke Zazhi) 2008;8(3)：568570
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