石圆圆 王雨生 徐建锋 张鹏 苏晓娜 侯慧媛 窦国睿 马吉献 蔡岩

第四军医大学西京医院眼科 西安 710032

目的　观察全身清除单核-巨噬细胞对激光诱导的小鼠CNV生成的影响，探讨Mφ在CNV生成中的作用及其机制。

方法　采用腹腔注射Cl2MDP-lip方法全身清除单核-巨噬细胞。对4只Cl2MDP-lip小鼠（正常成年C57BL/6J小鼠，腹腔注射Cl2MDP-lip原液 0.2ml/只），PBS-lip小鼠（腹腔注射PBS-lip原液，0.2ml/只）及正常小鼠（不进行任何注射）各1只，通过流式细胞仪分析注射后2d血液中单核细胞数量和免疫组化法观察脾脏中的Mφ数量，以确定药物效果。选取68只正常成年C57BL/6J小鼠，每只动物随机选一只眼，采用532nm倍频激光光凝法建立 CNV模型。实验分为3组：①正常对照组（24只），即只建立CNV模型，不进行其他干预；②全身清除单核-巨噬细胞组（Cl2MDP-lip组，24只），于激光光凝前3d、1d及光凝后1d、3d等4个时间点腹腔注射Cl2MDP-lip原液（0.2ml/只/次）；③PBS-lip平行对照组（PBS-lip组，20只），每只小鼠于上述4个时间点腹腔注射PBS-lip原液0.2ml/只/次）。各组分别于光凝后7d和14d行眼底荧光素血管造影（FFA）检查，以了解CNV生成率；于3d、14d、28d和56d摘除眼球（每组每个时间点n＝5）制作眼后段组织切片，进行组织病理学观察，以了解其厚度和面积。对Cl2MDP-lip组和正常对照组小鼠激光后3d 的眼球（n＝4）组织切片行免疫荧光染色，观察激光斑处Mφ浸润、内皮细胞增生、以及VEGF蛋白表达的情况。

结果　与正常小鼠和PBS-lip小鼠相比，腹腔注射Cl2MDP-lip后2d时，Cl2MDP-lip小鼠血液单核细胞明显减少，脾脏组织内Mφ几近消失，表明腹腔注射Cl2MDP-lip可有效清除单核-巨噬细胞。正常对照组/PBS-lip组/Cl2MDP-lip组小鼠激光后7d和14d时CNV生成率分别为60.68％/60.12％/62.30％和61.84％/61.90％/62.5％（P>0. 05）；激光后3d激光损伤处细胞密度分别为5178.800±451.917，4973.200±821.199和1786.360±214. 524（个/mm2），其中Cl2MDP-lip组小鼠明显小于两对照组（P<0.05）；激光后14d时，CNV厚度及面积分别为30.61±1.65/29.21±1.82/23.57±2.31μm和6279.40±690.20/5939.26±683.18/ 3360.16±357.05μm2，Cl2MDP-lip组小鼠明显小于其他两组（P<0.05）；28d时，Cl2MDP-lip组小鼠 CNV面积小于其他两组（2766.99±112.99 vs 3550.68±362.45，3959.89±463.42μm2，P<0.05），但CNV厚度差异不显著（P>0.05）；56d时，各组间CNV厚度及面积均无明显差异（P>0.05）；PBS-lip组与正常对照组各时间点各指标无明显差异（P> 0.05）。与正常对照鼠比较，Cl2MDP-lip小鼠激光后3d光斑处Mφ明显减少（254.417±59.989 vs 1098.183±160.830个/mm2，P<0.001），内皮细胞及VEGF表达量亦呈减少趋势。

结论　早期全身清除单核-巨噬细胞可减轻CNV生成的严重程度，但并不能阻止CNV的生成。这种作用可能是通过减少内皮细胞等细胞的增生浸润和下调VEGF等生长因子的表达量而实现的。