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3讨论
随着我国社会老龄化进程日益加速， 白内障患者日趋增多， 白内障手术也已精益求精， 但后发性白内障仍为白内障现代囊外摘除术后影响患者术后视力的主要因素之一［8］。白内障术后儿童PCO发生率几乎100%，成人白内障术后2～5a PCO发生率50%,而中老年患者则发展较慢［9］。因此，抑制晶状体上皮细胞的粘附、迁移与增殖是防治后发性白内障的关键。孙洁等［10］研究发现，将肝素制成缓释系统放入白内障术后的兔眼，可显著抑制后发性白内障的形成。我们研究三氧化二砷（As2O3）对兔眼晶状体上皮细胞作用时发现，其可明显抑制晶状体上皮细胞的增殖，同时在超声乳化白内障手术水分离时应用适当浓度的As2O3可抑制兔眼后发性白内障的形成［11,12］。但由于防治后发性白内障的各种药物在眼内的毒副作用，限制了其在临床的进一步应用，因此，寻找一种有效、副作用小的新型药物就成为当前防治后发性白内障最迫切的任务。RGD肽是一段3个氨基酸组成的短肽序列，是各种基质蛋白中最常见的基本构成成分,同时也广泛存在于细胞间识别系统［13］，能与许多细胞表面某些整合素(如α3β1，α5β1，αvβ1)特异性配体结合，是目前应用最广泛，且被证明最有效的促粘附多肽。RGD序列在体内67种蛋白质中发现,包括粘连蛋白(FN)、层粘连蛋白(LM)、玻连蛋白(vitronectin)、胶原、纤维蛋白原、vonWille2brand因子等［14］。这些基质蛋白是细胞外基质(ECM)的组成成分,也是各种细胞表面整合素受体的配体，在多种细胞表面存在着介导细胞粘附、移行、增殖的整合素受体［7,15-17］。人工合成或生物提取物中含有RGD序列的可溶性小分子多肽如RGDS肽能够竞争性地与细胞表面的整合素受体结合，抑制了细胞—细胞和细胞—基质的粘附,进而阻止了细胞的增殖、迁移、分化［13］。由于拮抗体内异常粘附，RGD肽已被用于治疗心血管病、骨质疏松、炎症及转移性肿瘤等疾病［18］。Hayman等［19］研究了有RGD序列的多肽，体外合成了RGDS，GRGDSP，GRGDSPC，GRGDAP，发现它们具有抑制正常大鼠肾、人骨肉瘤(MG263)和人纤维肉瘤(HT1080)细胞的粘连，GRGDS阻止肿瘤细胞在肺中滞留而抑制肿瘤细胞的肺转移。Hideaki等［20］研究发现，RGD肽能抑制人晶状体上皮细胞的粘附与迁移。
白内障术后，残留的晶状体上皮细胞在创伤修复过程中合成Ⅰ型胶原蛋白的量明显增加［21］,炎性巨核多核细胞可产生FN［22］；同时由于血—房水屏障的破坏,也可导致血浆中的FN流入房水中［23］。这些来自生理、病理反应的细胞外基质蛋白在后囊膜上极易发生沉积，通过与晶状体上皮细胞表面受体的结合,为其生长提供了适宜的内环境,促进晶状体上皮细胞的粘附、分化、增殖，RGD序列在晶状体上皮细胞和ECM的粘附过程中起着重要的桥梁作用［7］。我们通过在预先孵化有FN和Ⅰ型胶原蛋白的培养板中体外培养HLEB3 细胞，通过加入不同浓度的RGD肽来检测其对细胞粘附作用的影响；通过在不同时间段探测RGD肽对细胞增殖的作用。实验结果显示，当RGD达到50mg/L时，对细胞粘附无抑制作用（P>0.05），RGD达到125mg/L时，就对细胞的粘附有抑制作用，随着RGD的浓度增大作用增强，在500mg/L时抑制作用达到顶峰；而对细胞的增殖的抑制作用出现在125mg/L，且与作用时间存在交互作用，在48h，1 000mg/L抑制作用最强，由于RGD为一短肽，在体外很快降解，故呈明显的时间剂量依赖性。实验结果说明，外源性的RGD肽竞争性地与晶状体上皮细胞表面的整合素受体结合，从而阻止晶状体上皮细胞和细胞外基质的连接，当RGD肽的浓度增加到一定及随着作用时间的延长其可以抑制细胞的增殖。
表2 RGD肽对HLEB3 细胞增殖的抑制率（略）
表3 不同作用时间下系列浓度RGD肽对HLEB3 细胞增殖的抑制率析因分析（略）
我们在细胞水平进一步证实了RGD肽与晶状体上皮细胞竞争与细胞外基质粘附与增殖，从而明显抑制了HLEB3 细胞与包被了FN，Ⅰ型胶原蛋白的培养板的粘附、增殖,进而推断RGD肽作为阻断HLEB3 细胞和细胞外基质蛋白结合的小分子多肽, 将从根本上抑制后囊膜混浊的发生，在预防和抑制白内障术后后囊膜混浊方面具有广阔的应用前景。
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