谭浅  丁芝祥  刘双珍  刘丹  李忠庆  彭建强

中南大学湘雅医院眼科410078

湖南省人民医院心内科

目的：构建含单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV1-TK)基因的重组腺相关病毒载体质粒pSNAV2.0-TK，制备重组腺相关病毒rAAV2/HSV1-TK，并检测HSV1-TK基因在转染晶状体上皮细胞中的整合和表达，为后囊膜混浊的基因治疗奠定基础。

方法：用基因重组技术构建含HSV1-TK基因的重组腺相关病毒载体质粒pSNAV2.0-TK，并通过PCR和酶切鉴定；该质粒转染BHK-21细胞，经G418筛选出携带该质粒的载体细胞株BHK-21/TK，在辅助病毒的参与下包装成重组病毒rAAV2/HSV1-TK；用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法和高效液相色谱(HPLC)法检测重组病毒rAAV2/HSV1-TK的纯度，用斑点杂交法检测重组病毒的滴度；重组病毒rAAV2/HSV1-TK转染兔晶状体上皮细胞N/N1003A，用PCR和RT-PCR检测HSV1-TK基因的整合和表达。

结果：经PCR和酶切鉴定重组质粒pSNAV2.0-TK构建成功；成功制备了重组病毒rAAV2/HSV1-TK，病毒滴度达1×1012v.g./ml；重组病毒转染N/N1003A细胞后，PCR和RT-PCR检测显示TK基因在细胞中整合并且有效表达。

结论：成功构建了含HSV1-TK基因的重组腺相关病毒载体质粒，制备了高滴度重组病毒rAAV2/HSV1-TK，转染该病毒的晶状体上皮细胞中有HSV1-TK基因的有效表达，为后囊膜混浊的基因治疗奠定了实验基础。

声明:本站独家报道，转载须标明来源“中华眼科在线”