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　　口服DNA疫苗防治实验性脉络膜血管新生

　　张含 刘哲丽

　　中国医科大学附属第一医院眼科  110001

　　目的：考察一种口服抗血管新生DNA疫苗对于实验性脉络膜血管新生（choroidal neovascularization, CNV）的防治效果，并对其作用机制进行探讨，为抗血管新生DNA疫苗在眼科领域的应用提供线索和依据。

　　方法：利用电转化的方法将携带小鼠Flk-1基因的重组质粒导入减毒的沙门氏菌S. typhimurium Aro/A-中制成DNA疫苗，经口免疫C57BL/6小鼠。在此基础上以激光击穿Bruch膜诱导实验性CNV制作动物模型，10天后采用FITC-dextran心内灌流脉络膜铺片检查和组织病理学检查的方法定量分析此疫苗对于实验性CNV的防治效果，同时利用免疫组织化学染色的方法考察CNV中Flk-1的表达情况。为了探讨细胞毒性T细胞途径和抗体途径在本DNA疫苗抗血管新生过程中各自的贡献，分别消除两种途径中的重要细胞成分：CD8+ T 细胞和CD4+ T 细胞的作用，分析对DNA疫苗疗效的影响；同时应用双重免疫荧光染色法进一步探讨疫苗免疫后CD8+ T 细胞和CNV血管内皮细胞的关系。2个对照组分别为Vector组和空白对照组。

　　结果：DNA疫苗免疫组的实验性CNV的面积和厚度都明显小于两个对照组（P<0.001），Flk-1表达减低。去除CD8+ T 细胞明显降低了DNA疫苗的抗血管新生作用（P<0.001），而去除CD4+ T 细胞则没有影响（P>0.1）。双重免疫荧光染色揭示大量CD8+ T 细胞聚集于免疫组的实验性CNV血管内皮处，对照组CNV处未见CD8+ T 细胞。

　　结论：DNA疫苗明显抑制了实验性CNV的发展与Flk-1的表达，这种抗血管新生作用是通过激活细胞毒性T细胞来实现的。

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