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　　Notch信号对SD大鼠视网膜干细胞分化的作用研究

　　张锟，高玲

　　中南大学湘雅二医院眼科 410011

　　目的:观察Notch信号对体外培养的SD大鼠胚胎视网膜干细胞增殖分化的影响。

　　方法：1、从胎龄16天SD大鼠胚胎视网膜神经上皮分离视网膜细胞，用悬浮培养体系培养，进行形态学观察，并用免疫细胞化学法鉴定细胞类型和分析Notch信号的表达。

　　2、将培养的细胞分为两组，分别加入不同成分的培养基：实验组即Notch信号抑制组，培养基成分为DMEM/F12+N2+5%FBS+10µM γ-Secretase Inhibitor X+1%DMSO；对照组培养基成分为DMEM/F12+N2+5%FBS+1%DMSO。培养14天后行免疫细胞化学法鉴定细胞类型和分析Notch信号的表达，比较两组间各种抗原表达的阳性率。

　　结果：1、原代及传代培养的视网膜干细胞大部分表达Notch1胞内段及其下游转录因子Hes1，少量细胞表达bHLH转录因子NeuroD和Mash1；扩增的细胞自发分化后大量细胞表达bHLH转录因子NeuroD和Mash1，少量细胞表达Notch 1胞内段和Hes1。

　　2、实验组Notch信号被抑制后，Nestin、GFAP阳性率显著低于对照组，ß－Tubulin阳性率显著高于对照组，而Recoverin阳性率与对照组差异无显著性。

　　结论：1、Notch1信号有利于视网膜干细胞状态的维持，可能参与了对体外培养的视网膜干细胞分化的抑制。

　　2、抑制Notch信号可促进体外培养的视网膜干细胞向神经元分化，同时也抑制了Müller细胞的分化。

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