基础             1246                                      PO0119

　　体外氧化应激模型中视网膜色素上皮细胞线粒体DNA的损伤及干预

　　樊莹 唐敏

　　上海交通大学附属第一人民医院 眼科 200080

　　目的 研究视网膜色素上皮（retinal pigment epithilial ,RPE）细胞在氧化应激(oxidative stress)损伤模型中细胞存活率(survival rate)、细胞内活性氧（reactive oxygen species ,ROS）浓度和细胞线粒体DNA（mitochondrial DNA，mtDNA）的损伤规律；并观察褪黑激素（MLT）对mtDNA的保护作用。

　　方法 实验以培养的人视网膜色素上皮细胞株为研究对象，给予不同浓度和时间的过氧化氢（H2O2）刺激，以建立体外培养的RPE细胞氧化应激损伤模型，对模型中的细胞存活率（MTT法）、ROS浓度（荧光分光光度法）和mtDNA（RT-PCR法）损伤进行测量和分析，然后给予MLT（分为即刻反应组、短期培养组1hr和长期培养组2w）实施干预，观察上述指标的变化。

　　结果 H2O2的浓度为70μmol/l、120μmol/l、200μmol/l时MTT值和ROS荧光值变化不明显，与空白对照组无显著差异；当H2O2浓度升至340μmol/l和580μmol/l时，MTT值和ROS荧光值明显下降；mtDNA缺失片段的含量随H2O2浓度升高和作用时间的延长而增加，两者呈正相关（pearson相关分析：含量与浓度r=0.698，P=0.0116；含量与时间r=0.557，P=0.0599）；mtDNA保留长片段的含量随H2O2浓度升高和作用时间的延长而减少，两者呈负相关（含量与浓度r=-0.580，P=0.048；含量与时间r=-0.547，P=0.0657）。在干预实验的即刻反应组和短期培养组中，模型中细胞mtDNA的损伤程度与MLT的浓度变化无相关性；但在长期培养组中两者显著相关（pearson相关分析：其中缺失性分析呈负相关r=-0.988，P=0.012；完整性分析呈正相关r=0.994，P=0.006）。

　　结论 在RPE细胞的氧化应激损伤中，存在mtDNA的损伤改变，并且这种改变与氧化应激之间具有明显的浓度与时间的依赖性，可以作为评价氧化应激损伤程度的良好指标，在早期低浓度刺激时优于MTT和ROS荧光值。通过MLT的长期干预（2w）可以明显减轻mtDNA的氧化损伤程度。

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