角膜结膜及泪器病             1519                                      PO0266

　　三种体外培养法比较兔角膜缘上皮细胞生物学特性

　　许永根  王薇  张弛 吴乐萌

　　北京大学第三医院，北京大学眼科中心  100083

　　目的  对单纯消化法，消化、冷藏、复苏法和组织块法传代培养的角膜缘上皮细胞生物学活性进行对比分析，以期确定最佳角膜缘上皮细胞体外传代培养法。 

　　方法  采用3T3成纤维细胞滋养层体系，分别用单纯消化法，消化、冷藏、复苏法及组织块法体外传代培养兔角膜缘上皮细胞，对细胞贴壁时间，分裂周期，单克隆形成能力等进行分析，同时采用MTT比色法和 3H-thymidine的测定，分析细胞代谢活性和增殖力，采用AE-5免疫组织化学技术鉴定培养的角膜上皮细胞， HE 染色观察培养的角膜上皮细胞形态， PAS 染色鉴别结膜杯状细胞。

　　结果  采用单纯消化法培养的角膜缘上皮细胞贴壁时间和分裂周期最短，单克隆形成力，细胞代谢和增殖力最强，消化、冷藏、复苏法次之，组织块法最弱。但三种方法之间差异无统计学意义。细胞形态、结构与正常兔角膜上皮无明显差异,培养中未见结膜杯状细胞。

　　结论  用三种体外培养法传代培养的角膜缘上皮细胞在单纯消化法中其生物学活性优于其它两种培养法，但三种方法之间差异无统计学意义。

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